Etablering och genetisk manipulering av Murine Hepatocyte Organoids

Levern är det största organet hos däggdjur. Det spelar en viktig roll i glukoslagring, proteinsekresion, metabolism och avgiftning. Som exekutor för de flesta leverfunktioner har primära hepatocyter begränsad prolifererande kapacitet. Detta kräver upprättandet av ex vivo hepatocytexpansion modeller för leverfysiologisk och patologisk forskning. Här isolerade vi murin hepatocyter genom två steg av kollagenas perfusion och etablerade en 3D organoid kultur som "mini-lever" för att rekapitulera cell-cell interaktioner och fysiska funktioner. Organoiderna består av heterogena cellpopulationer inklusive stamceller och mogna hepatocyter. Vi introducerar processen i detalj för att isolera och odla murin hepatocyter eller fetala hepatocyter för att bilda organoider inom 2-3 veckor och visa hur man passerar dem genom att mekaniskt pipettera upp och ner. Dessutom kommer vi också att introducera hur man smälter organoiderna i enstaka celler för lentivirusinfektion av shRNA / utomkvedskonstruktion, siRNA-transfektion och CRISPR-Cas9-teknik. Organoiderna kan användas för läkemedelsskärmar, sjukdomsmodellering och grundläggande leverforskning genom modellering av leverbiologi och patobiologi.