使用工程 HEK 细胞筛选激活 MRGPRX2 的肽

识别特定于具有治疗意义的细胞受体的配体对于许多应用至关重要，包括设计和开发新的治疗方法。与Mas相关的G蛋白受体-X2（MRGPRX2）是调节乳腺细胞活化的重要受体，因此指导一般免疫反应。已确定MGPRX2的众多配体，包括PAMP、防御素、LL-37和其他蛋白质片段（即降解白蛋白）等内源性肽。进一步鉴定MGPRX2特定配体需要筛选大量的肽（即肽库）;然而，桅杆细胞很难和昂贵的体 外 维持，因此，不经济地用于筛选大量的分子。本文演示了使用 MRGPRX2 表达 HEK 细胞设计、开发和筛选小肽分子库的方法。这种细胞系相对容易和便宜的维护，可用于 体外 高通量分析。一种对钙敏感的Fura-2荧光染料，用于监测活化后细胞内钙通量。Fura-2 的荧光强度在 510 nm 时与激发波长 340 和 380 nm 的比例用于计算钙浓度。用于验证该系统的肽库基于内源性前列腺素 N-终端 12 （PAMP-12） 秘密，已知该秘密库将 MRGPRX2 与高特异性和亲和力结合。随后的肽通过氨基酸截断和应用于PAMP-12的阿兰宁扫描技术产生。此处描述的方法简单且价格低廉，但坚固耐用，用于筛选大量化合物库，以识别在受体激活中发挥重要作用的结合域和其他重要参数。