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Biochemistry

RNAの1H R1ρ緩和分散実験のサンプル調製とセットアップの実態

Published: July 9th, 2021

DOI:

10.3791/62470

1Department of Medical Biochemistry and Biophysics, Karolinska Institutet

RNAは非常に柔軟な生体分子であり、構造の変化はRNA分子が細胞伝達物質およびモジュレーターとして実行する機能において重要な役割を果たす。これらの動的状態はほとんどの構造法に隠されたままであるが、R1ρ緩和分散(RD)分光法は、原子分解能でマイクロ〜ミリ秒の体制における立体ダイナミクスの研究を可能にする。観察された核として1Hを使用すると、さらにカバーされた時間体制を拡大し、水素結合および塩基対合への直接アクセスを提供する。

このような研究の困難なステップは、高純度および高収率サンプル調製、潜在的に13Cおよび15Nラベル付け、ならびに以前に見えなかった状態の人口、為替レート、および二次構造を抽出するためのデータの実験と適合の設定である。このプロトコルは、適切なRNAサンプルの調製と、同位体標識およびラベルなしRNAサンプルの両方を用いた1HR1ρ実験の設定を確実にするための、サンプル調製における重要なハンズオンステップを提供します。

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