Stabilire culture binarie stabili di Saccharibacteria simbiotici dalla cavità orale

Molte specie batteriche non possono essere coltivate in laboratorio utilizzando metodi standard, ponendo una barriera significativa allo studio della maggior parte della diversità microbica sulla terra. Sono necessari nuovi approcci per coltura di questi batteri incolti in modo che gli investigatori possano studiare efficacemente la loro fisiologia e il loro stile di vita utilizzando i potenti strumenti disponibili in laboratorio. La radiazione di phyla candidata (CPR) è uno dei più grandi gruppi di batteri incolti, che comprende ~ 15% della diversità vivente sulla terra. Il primo isolato di questo gruppo è stato un membro del phylum Saccharibacteria,ceppoTM7x. TM7x è un batterio insolitamente piccolo che vive come simbionte a diretto contatto con un ospite batterico, Schaalia odontolytica, ceppo XH001. Sfruttando le dimensioni delle cellule insolitamente piccole e il suo stile di vita come organismo simbiotico, abbiamo sviluppato un protocollo per coltura rapida dei Saccharibacteria dalla placca dentale. Questo protocollo mostrerà come filtrare una sospensione della placca dentale attraverso un filtro da 0,2 μm, quindi concentrare le cellule Saccharibacteria raccolte e infettare una coltura di organismi ospiti. La cocoltura risultante può essere passageata come qualsiasi normale coltura batterica e infezione è confermata dalla PCR. La coltura binaria risultante può essere mantenuta in laboratorio e utilizzata per esperimenti futuri. Mentre la contaminazione è una possibilità, la coltura binaria può essere purificata sia filtrando ulteriormente e rifezione dell'ospite, sia placcando la cultura binaria e lo screening per le colonie infette. Speriamo che questo protocollo possa essere esteso ad altri tipi di campioni e ambienti, portando alla coltivazione di molte più specie nella RCP.