저자들은 파비엔 프로머, 장 이브 린켈, 데이비드 호프만, 모니크 프룬드에게 기술 지원을 부탁드립니다. 이 작품은 ARMESA (협회 드 Recherche et Développement en Médecine et Santé Publique), 유럽 지역 개발 기금 (ERDF)을 통해 유럽 연합과 그랜트 ANR-17-CE14-0001-01H.d.S.

모든 동물 실험은 유럽 표준 2010/63/EU및 스트라스부르 대학의 동물 실험 윤리에 대한 CREMEAS 위원회 (코미테 레지오날 데티크 앙 마티에르 디에리포앙 마티에르 데테리션 애니멀 스트라스부르)에 따라 수행되었습니다. 프로토콜은 그림 1에괄호로 표시됩니다.
1. 골수 수집 및 고정 (그림 1A)
주의: 이 절차는 발암성,...

<ol>
	<li>Machlus, K. R., Italiano, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incredible+journey:+From+megakaryocyte+development+to+platelet+formation.">The incredible journey: From megakaryocyte development to platelet formation.</a> The Journal of Cell Biology. 201 (6), 785-796 (2013).</li><li>Zucker-Franklin, D., Termin, C. S., Cooper, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+changes+in+the+megakaryocytes+of+patients+infected+with+the+human+immune+deficiency+virus+(HIV-1).">Structural changes in the megakaryocytes of patients infected with the human immune deficiency virus (HIV-1).</a> American Journal of Pathology. 134 (6), 9 (1989).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biogenesis+of+the+demarcation+membrane+system+(DMS)+in+megakaryocytes.">Biogenesis of the demarcation membrane system (DMS) in megakaryocytes.</a> Blood. 123 (6), 921-930 (2014).</li><li>Scandola, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+electron+microscopy+to+study+megakaryocytes.">Use of electron microscopy to study megakaryocytes.</a> Platelets. , 1-10 (2020).</li><li>Behnke, O., Forer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+megakaryocytes+to+platelets:+platelet+morphogenesis+takes+place+in+the+bloodstream.">From megakaryocytes to platelets: platelet morphogenesis takes place in the bloodstream.</a> European Journal of Haematology. 60, 3-23 (2009).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+megakaryocyte+development+in+the+native+bone+marrow+environment.">Characterization of megakaryocyte development in the native bone marrow environment.</a> Platelets and Megakaryocytes. 788, 175-192 (2012).</li><li>Brown, E., Carlin, L. M., Nerlov, C., Lo Celso, C., Poole, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+membrane+extrusion+sites+drive+megakaryocyte+migration+into+bone+marrow+blood+vessels.">Multiple membrane extrusion sites drive megakaryocyte migration into bone marrow blood vessels.</a> Life Science Alliance. 1 (2), 201800061 (2018).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Megakaryocytes+use+in+vivo+podosome-like+structures+working+collectively+to+penetrate+the+endothelial+barrier+of+bone+marrow+sinusoids.">Megakaryocytes use in vivo podosome-like structures working collectively to penetrate the endothelial barrier of bone marrow sinusoids.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. , 15024 (2020).</li><li>Cramer, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+of+platelet+formation+by+human+megakaryocytes+cultured+with+the+Mpl+ligand.">Ultrastructure of platelet formation by human megakaryocytes cultured with the Mpl ligand.</a> Blood. 89 (7), 2336-2346 (1997).</li><li>Heijnen, H. F. G., Debili, N., Vainchencker, W., Breton-Gorius, J., Geuze, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivesicular+Bodies+Are+an+Intermediate+Stage+in+the+Formation+of+Platelet+&#945;-Granules.">Multivesicular Bodies Are an Intermediate Stage in the Formation of Platelet &#945;-Granules.</a> Blood. 7 (7), 2313-2325 (1998).</li><li>Gupta, N., Jadhav, K., Shah, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emperipolesis,+entosis+and+cell+cannibalism:+Demystifying+the+cloud.">Emperipolesis, entosis and cell cannibalism: Demystifying the cloud.</a> Journal of Oral and Maxillofacial Pathology. 21 (1), 92 (2017).</li><li>Centurione, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+and+pathologic+emperipolesis+of+neutrophils+within+megakaryocytes+associated+with+marrow+fibrosis+in+GATA-1low+mice.">Increased and pathologic emperipolesis of neutrophils within megakaryocytes associated with marrow fibrosis in GATA-1low mice.</a> Blood. 104 (12), 3573-3580 (2004).</li><li>Ellis, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+bone,+hemopoietic+stem+cells,+and+vasculature.">The relationship between bone, hemopoietic stem cells, and vasculature.</a> Blood. 118 (6), 1516-1524 (2011).</li><li>Bornert, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoskeletal-based+mechanisms+differently+regulate+in+vivo+and+in+vitro+proplatelet+formation.">Cytoskeletal-based mechanisms differently regulate in vivo and in vitro proplatelet formation.</a> Haematologica. , (2020).</li></ol>

그들의 토착 환경에서 메가 카요 세포의 직접 검사는 메가 karyopoiesis 및 혈소판 형성을 이해하는 데 필수적이다. 본 원고에서, 우리는 골수 홍조와 침수에 의한 고정을 결합한 투과 전자 현미경 법을 제공하여 골수에서 일어나는 메가 카요세포 형태 발생의 전체 과정의 형태 학적 특성을 시상할 수 있도록 합니다.
골수의 플러싱은 고품질 플러싱의 성공은 작업자의 연습...

메가카요세포는 골수에 국한되어 혈소판 생산1을담당하는 대형 폴리플로이드 세포를 특수화한다. 그(것)들은 복잡한 성숙 과정을 통해 조혈 줄기 세포에서 유래하고, 그 동안 거대 karyocyte 전구체가 점진적으로 크기가 증가하는 동안, 세포질과 핵2에있는 광대한 수반성 형태 변경을 겪고 있는 동안. 성숙 하는 동안, 메가 karyocytes 포함 하 여 구별 할 수 있는 구조 요소의 수를 개발: 폴리로부이트 핵, 경계 막 시스템을 형성 하는 표면 막의 질 (DMS), 액틴 기반 사이토스켈레탈 네트워크에 의해 둘러싸인 세포기관이 없는 주변 영역, α-과립, 고밀도 과립, 굴절을 포함 하 여 수많은 세포기관. 초구조적 수준에서, 관찰된 주요 수정은 DMS3에의해 분리된 이산 영역으로 세포질 구획화이다. 멤브레인의이 광범위한 공급은 혈소판 생산의 초기 단계에서 긴 세포질 공정의 확장을 연료, 다음 순환 내부 혈소판으로 리모델링됩니다. 메가카요세포 분화 및 성숙 중 모든 결함은 혈소판 수 및/또는 혈소판 기능의 기간 동안 혈소판 생산에 영향을 미칠 수 있습니다. 
얇은 층 투과 전자 현미경 검사법 (TEM)은 혈전 포에이시스4,5의생리학에 대한 우리의 이해를 형성 한 거대 카르요세포의 고품질 초구조를 제공하는 수십 년 동안 선택의 이미징 접근 방식이었다. 이 논문은 모든 골수 세포 유형을 분석하는 기초가 될 수 있는 토착 골수 마이크로 환경 내에서 발생하는 혈소판 생물 발생 과정을 포착할 수 있는 표준화된 TEM 방법에 초점을 맞추고 있습니다. 우리는 미숙한 에서 완전히 성숙에 메가 카르요세포의 개발의 초구조적 예를 제공, 이는 시누소이드6의미세 순환으로 세포질 공정을 확장. 우리는 또한 골수의 재생 및 혈소판 생산 능력에 지시, 다른 메가 카요세포 성숙 단계를 정량화하는 쉬운 절차를 설명합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2,4,6-Tri(dimethylaminomethyl)phenol (DMP-30)</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose type LM-3 Low Melting Point Agar</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences, USA</td>
			<td>1670-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2 Calcium chloride hexahydrate</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>2083</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper grids 200 mesh thin-bar</td>
			<td>Oxford Instrument, Agar Scientifics, England</td>
			<td>T200-CU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylarsinic acid sodium salt trihydrate</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>8.20670.0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dodecenyl Succinic Anhydride (DDSA)</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double Edge Stainless Razor blade</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences-EMS, USA</td>
			<td>EM-72000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolut</td>
			<td>VWR International, France</td>
			<td>20821296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper, 90 mm diameter</td>
			<td>Whatman, England</td>
			<td>512-0326</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat embedding silicone mould</td>
			<td>Oxford Instrument, Agar Scientific, England</td>
			<td>G3533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde 25%</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences-EMS, USA</td>
			<td>16210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat plate Leica EMMP</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>705402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histo Diamond Knife 45&#176;</td>
			<td>Diatome, Switzerland</td>
			<td>1044797</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JEOL 2100 Plus TEM microscope</td>
			<td>JEOL, Japan</td>
			<td>EM-21001BU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead citrate - Ultrostain 2</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>70 55 30 22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LX-112 resin</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2 Magnesium chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma, France</td>
			<td>M2393-100g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium - Poly(butyl methacrylate-co-methyl methacrylate)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences-EMS, USA</td>
			<td>15320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nadic Methyl Anhydride (NMA)</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide 2%</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>19172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propylene oxide (1.2-epoxypropane)</td>
			<td>Sigma, France</td>
			<td>82320-250ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline injectable solution 0.9% NaCl</td>
			<td>C.D.M Lavoisier, France</td>
			<td>MA 575 420 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Surgical steel blade</td>
			<td>Swann-Morton, England</td>
			<td>.0508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium tetraborate - Borax</td>
			<td>Sigma, France</td>
			<td>B-9876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>84100-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter 0.2&#181;m</td>
			<td>Pall Corporation, USA</td>
			<td>514-4126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidine blue</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>N10-70975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimmer EM TRIM2</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>702801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultramicrotome Ultracut UCT</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>656201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl acetate</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>23620</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in situ exploration of murine megakaryopoiesis using transmission electron microscopy

메가카요세포의 분화 및 성숙은 골수의 세포 및 세포 외 구성 요소와 밀접한 관련이 있습니다. 이러한 공정은 폴리플로이드 및 폴리로부트 핵과 같은 거대 카르요세포 세포질에서 필수 구조의 점진적인 출현, 경계막 시스템(DMS) 및 순환 혈소판에서 발견되는 조밀하고 알파 과립이라고 불리는 내부 멤브레인 네트워크인 폴리플로이드 및 폴리로부트 핵과 같은 필수 구조의 점진적인 외관을 특징으로 합니다. 본 기사에서는, 우리는 골수의 성숙 단계와 세포 밀도를 정의하는 주요 특성의 식별을 허용하는 전송 전자 현미경 검사법 (TEM)을 사용하여 뮤린 거대 카르요세포의 시투 초구조 적 연구를위한 표준화 된 프로토콜을 설명합니다. 뼈 로는 플러시, 고정, 에탄올탈수, 플라스틱 수지에 내장, 횡단면을 생성하기 위해 장착된다. 반박형 및 얇은 단면은 각각 조직학 및 TEM 관측을 위해 준비됩니다. 이 방법은 모든 EM 시설에서 모든 골수 세포에 사용할 수 있으며 동일한 마우스에서 여러 이미징 접근법의 조합을 허용하는 작은 샘플 크기를 사용하는 장점이 있습니다.

골수 히스토로지 가벼운 현미경하에서 골수 톨루이딘 청색 조직학을 관찰하는 것은 조직 압축성, 미세혈관 연속성, 메가카르요세포의 크기 및 형상(도 1D)과 같은 관점에서 전체 조직 아키텍처를 빠르게 분석하는 열쇠이다. 그것은 골수 블록에서 더 깊은 절단의 필요성을 결정하기 위해 초박형 섹션 전에 수행됩니다. 거대한 크기와 핵 로빙으로 ?...

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In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy

여기서, 우리는 투과 전자 현미경 검사법(TEM)을 사용하여 시투에서 거대 카르요세포의 초구조를 분석하는 프로토콜을 제시한다. 뮤린 뼈 졸은 수집, 고정, 에폭시 수지에 내장및 초박형 섹션에서 절단됩니다. 대조 염색 후, 골수는 120 kV에서 TEM 현미경으로 관찰된다.

시투에서 전염 전자 현미경 검사를 사용하여 뮤린 메가 카요포이스의 탐사

Differentiation and maturation of megakaryocytes occur in close association with the cellular and extracellular components of the bone marrow. These ...

이 절차의 전반적인 목표는 마우스 골수 내에 위치한 메가카요세포의 초구조를 관찰하고 고해상도 전송 전자 현미경을 사용하여 다른 성숙 단계를 정량화하는 것이다. 주요 장점은 우리가 알고있는 성숙의 전체 수준에 도달하지 않는 체외 배양 메가 카요 세포와 다른 네이티브 환경에서 메가 카요 사이클의 직접 검사입니다. 표준 프로토콜에 따라 12에서 18주 된 C57BL/6 마우스에서 경골과 대퇴골을 수확한 후 날카로운 면도날을 사용하여 각 뼈에서 표피를 제거합니다.각 뼈에 핀셋을 들고, 골의 한쪽 끝에 코딜레이트 버퍼로 채워진 5밀리리터 주사기에 부착된 21 게이지 바늘을 삽입하고 골수를 신선한 카코디레이트 버퍼 2밀리리터를 포함하는 15 밀리리터 수집 튜브로 플러시합니다. 플러싱 직후 플라스틱 파이펫을 사용하여 골수 실린더를 실온에서 60분 동안 신선한 글루타랄데히드 고정 용액 1밀리리터로 옮기습니다. 아가로즈에 골수를 담근 경우 고정 샘플을 신선한 캐코디레이트 버퍼에 넣고 플라스틱 파이펫을 사용하여 골수를 유리 슬라이드로 조심스럽게 옮겨보십시오.따뜻한 파이펫을 사용하여 골수 실린더에 2%의 액체 화루한 방울을 빠르게 바르고 즉시 슬라이드를 얼음 위에 1~2분 간 놓습니다. 한천이 고화되면 스테레오 현미경과 날카로운 면도날을 사용하여 각 골수 실린더의 사지를 버리고 손질된 골수 블록을 1밀리리터 미세센트심류 튜브로 이송하여 1밀리리터의 카코디레이트 버퍼를 함유합니다. 수지 포함의 경우, 코칼레이트 버퍼로 블록을 한 번 세척하고 증류수로 한 번 세척하기 전에 화학 후드의 1 %osmium 테트산화물을 화학 후드의 4 시간 동안 1 시간 동안 수정하십시오.물을 씻은 후, 1 시간 동안 증류수에 4 %의 uranyl 아세테이트로 블록을 얼룩지게한 다음 증류수에 두 개의 세척이 시연되었습니다. 마지막 세척 후, 표시된 대로 에탄올 몰입및 증류수의 상승 시리즈를 통해 블록을 탈수. 골수 내부의 에폭시 수지의 균일한 침투 및 중합을 얻으려면, 15 분 동안 프로필렌 옥사이드의 두 개의 연속 목욕에서 블록을 배양한 후 실내 온도에서 느린 회전 셰이커에서 1 시간 동안 100 % 프로필렌 산화물과 에폭시 수지의 1 대 1 혼합물로 샘플을 배양하십시오.인큐베이션의 끝에서, 같은 조건에서 하룻밤 배양을 위해 골수 블록에 100 %에폭시 수지추가 다음 2 시간의 다른 잠복에 대한 100 %에폭시 수지추가. 인큐베이션의 끝에서, 현미경을 사용하여 평평한 실리콘 금형의 골수 블록을 방향을 지정하여 후속 횡방향 단면을 허용하고 48 시간 동안 섭씨 60도에 놓기 전에 에폭시 수지로 금형을 채웁니다. 초박형 단면의 경우 샘플 블록을 초미세절 지지체에 장착하고 지지대를 샘플 홀더에 장착합니다.다이아몬드 밀링 커터를 사용하여 45도 각도로 샘플을 다듬어 조직 주위의 과잉 수지를 제거하기 위해 물 탱크가 장착된 다이아몬드 나이프 블레이드를 사용하여 조직 및 TEM 분석을 위해 500 나노미터 두께의 단면을 각각 절단한 다음 루프를 사용하여 500 나노미터 두께의 단면을 이용하여 나노계의 두꺼운 표면을 밀어 내고 10나노미터의 두꺼운 유리를 밀어 내고 나노계를 밀어 냅니다. 아래에 종이 필터가있는 200 메쉬 얇은 막대 구리 그리드에 섹션. toluidine 블루 스테인링의 경우, 60도 핫 플레이트에 500 나노미터 두께의 섹션을 그린 후, 1~2분 간 배양하기 위해 증류수에 여과된 1%의 토루이딘 블루를 섹션에 추가합니다. 인큐베이션이 끝나면 증류수로 샘플을 씻으실 수 있습니다.슬라이드가 건조되면 마운팅 매체를 사용하여 덮개 슬립으로 샘플을 장착하고 가벼운 현미경으로 샘플을 볼 수 있습니다. 대비 염색의 경우 100 나노미터 섹션을 4%의 우라일 아세테이트로 5분간, 증류수로 5분간 세워세이드합니다. 마지막 세척 후, 3 분 동안 리드 구연산으로 섹션을 얼룩, 시연 된 대로 증류수에 세 5 분 세척.마지막 세척 후 각 그리드의 하면을 먼저 필터 용지와 접촉하여 그리드를 필터 용지에 배치하여 건조시합니다. TEM에 의해 단면을 검사하려면 그리드가 건조되었을 때 낮은 배율을 선택하여 준비의 일반적인 품질을 평가합니다. 각 횡방향 섹션에서 각 성숙 단계에서 메가카요세포의 수를 결정하려면, 더 높은 배율을 선택하고 완전히 조직에 의해 덮여 사각형에서만 단계 I, II 또는 III 메가카요세포의 수를 정량화한다.이러한 대표적인 조직학적 분석에서, 메가카요세포의 소형 선도성 및 크기 및 형상을 명확하게 관찰할 수 있다. 뮤린 메가카요세포는 성숙의 4단계로 나뉩니다. 단계 I 메가카요세포에는 큰 핵이 있습니다.경계 막 시스템의 초기 검출 단계의 존재는 또한이 단계의 주요 기준이다. 단계 II에서, 과립 형성이 시작되고 경계 막 시스템의 개발이 시작된다. 단계 III 거대 카르요세포는 잘 발달된 경계 막 시스템, 세포질 영토 및 세포기관이 없는 주변 구역및 편심으로 위치한 핵을 가진 거대한 세포입니다.메가카요세포 성숙의 피레노세포 단계는 알몸 핵이 특징입니다. 도시된 바와 같이, 거대 카르요세포는 내피 세포와 접촉하여 자주 관찰된다. 경우에 따라, 메가 카요세포는 내피를 관통하거나 부비동 루멘으로 프로플라츠를 확장하는 짧은 침략적인 돌출부를 형성합니다.TEM은 또한 초구조적 세부 사항의 시각화뿐만 아니라 거대 카르요세포에 의해 침몰한 조혈 세포의 존재를 허용합니다. 골수 플러싱은 골수 세척 후 신중하고 즉시 수행해야 합니다. 조직의 무결성을 최대화하기 위해, 골수는 탈수 하기 전에 한천의 젤로 둘러싸여 있습니다.이 절차에 따라, 골수 블록은 상이한 배율에서 심화될 수 있거나, 집중된 이온 빔 스캐닝 전자 현미경 검사법과 같은 다른 3D 전자 현미경 분석에 사용될 수 있다.