In situ Utforskning av Murine Megakaryopoiesis med transmissionselektronmikroskopi

Differentiering och mognad av megakaryocyter förekommer i nära samband med cellulära och extracellulära komponenter i benmärgen. Dessa processer kännetecknas av det gradvisa utseendet av väsentliga strukturer i megakaryocytcytplasman såsom en polyploid och polylobulated kärna, ett internt membrannätverk som kallas avgränsning membransystem (DMS) och de täta och alfagranulat som finns i cirkulerande trombocyter. I den här artikeln beskriver vi ett standardiserat protokoll för in situ ultrastructural studie av murine megakaryocyter med hjälp av överföring elektronmikroskopi (TEM), vilket möjliggör identifiering av viktiga egenskaper som definierar deras mognadsstadium och cellulära densitet i benmärgen. Benmärgar spolas, fixeras, dehydreras i etanol, bäddas in i plastharts och monteras för att generera tvärsnitt. Halvtunna och tunna sektioner är förberedda för histologiska respektive TEM observationer. Denna metod kan användas för alla benmärgsceller, i alla EM-anläggningar och har fördelen att använda små provstorlekar som möjliggör kombinationen av flera bildframställningsmetoder på samma mus.