Filtri leucodeplezione-Cellule CD34+ derivate come fonte cellulare per studiare la differenziazione dei megacariociti e la formazione piastrinica

L'espansione e la differenziazione in vitro di progenitori ematopoietici umani in megacariociti in grado di allungare i proplatatori e rilasciare piastrine consente uno studio approfondito dei meccanismi alla base della biogenesi piastrinica. I protocolli di coltura disponibili si basano principalmente su progenitori ematopoietici derivati dal midollo osseo o dal sangue del cordone ombelicale che sollevano una serie di preoccupazioni etiche, tecniche ed economiche. Se ci sono già protocolli disponibili per ottenere cellule CD34 dal sangue periferico, questo manoscritto propone un protocollo semplice e ottimizzato per ottenere cellule CD34 + da filtri leucodeplezione prontamente disponibili nei centri del sangue. Queste cellule sono isolate dai filtri leucodepletici utilizzati nella preparazione di prodotti trasfusionali, corrispondenti a otto donazioni di sangue. Questi filtri sono pensati per essere scartati. Viene descritta una procedura dettagliata per raccogliere progenitori ematopoietici identificati come cellule CD34+ da questi filtri. Il metodo per ottenere megacariociti maturi che estendono i proplati mentre discutono della loro evoluzione fenotipica è anche dettagliato. Infine, il protocollo presenta un metodo di pipettaggio calibrato, per rilasciare in modo efficiente piastrine morfologicamente e funzionalmente simili a quelle native. Questo protocollo può servire come base per valutare i composti farmacologici che agiscono in varie fasi del processo per sezionare i meccanismi sottostanti e avvicinarsi alle rese piastriniche in vivo.