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Biochemistry

Fabricação simples de coluna capilar de alto desempenho com a abordagem flashpack

Published: December 4th, 2021

DOI:

10.3791/62522

1Laboratory of Bioinformatics Methods in Combinatorial Chemistry and Biology, Shemyakin-Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistry, Russian Academy of Sciences, 2Department of Molecular Neuroimmune Signalling, Shemyakin-Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistry, Russian Academy of Sciences

Abstract

A cromatografia líquida de ultra-alto desempenho capilar (UHPLC) é atualmente um método de escolha para a etapa de separação da amostra na proteômica baseada em LC-MS. No entanto, as colunas capilares são muito menos robustas em comparação com seus contratipos de fluxo mais elevados. Por causa da fácil contaminação e bloqueio, muitas vezes eles precisam de substituição. Isso faz deles uma parte marcadamente cara do custo total de análise LC-MS. A embalagem interna de colunas capilares UHPLC economiza muito dinheiro e permite a personalização. No entanto, o procedimento padrão de embalagem na bomba de pressão de 100 barras funciona bem apenas para colunas HPLC, mas é muito lento para sorbents UHPLC. Aqui fornecemos uma descrição de um protocolo FlashPack otimizado aplicado à mesma configuração de bomba de pressão de 100 barras. O método é baseado na embalagem de chorume de concentração sorbent ultra-alto e é desenvolvido para fabricação interna de colunas capilares UHPLC de comprimento ilimitado em tempo razoável.

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