Perles chargeant des protéines et des acides nucléiques dans des cellules humaines adhérentes

De nombreuses expériences d’imagerie de cellules vivantes utilisent des particules exogènes (p. ex., peptides, anticorps, billes) pour étiqueter ou fonctionner dans les cellules. Cependant, l’introduction de protéines dans une cellule à travers sa membrane est difficile. La sélection limitée de méthodes actuelles est difficile avec une faible efficacité, nécessite des équipements coûteux et techniquement exigeants, ou fonctionne dans des paramètres étroits. Ici, nous décrivons une technique relativement simple et rentable pour charger l’ADN, l’ARN et les protéines dans des cellules humaines vivantes. La charge de billes induit une perturbation mécanique temporaire de la membrane cellulaire, permettant aux macromolécules de pénétrer dans les cellules adhérentes et vivantes des mammifères. À moins de 0,01 USD par expérience, le chargement des billes est la méthode de chargement de cellules la moins coûteuse disponible. De plus, la charge en billes ne stresse pas considérablement les cellules et n’a pas d’impact sur leur viabilité ou leur prolifération. Ce manuscrit décrit les étapes de la procédure de chargement des perles, les adaptations, les variations et les limitations techniques. Cette méthodologie est particulièrement adaptée à l’imagerie des cellules vivantes, mais fournit une solution pratique pour d’autres applications nécessitant l’introduction de protéines, de perles, d’ARN ou de plasmides dans des cellules de mammifères vivantes et adhérentes.