Imunofenoftipagem e Triagem celular de MKs humanos de fontes primárias humanas ou in vitro diferenciados de progenitores hematopoiéticos

A diferenciação de megacariócito (MK) abrange uma série de ciclos endomitóticos que resultam em uma célula altamente poliploide (atingindo até mesmo >64N) e extremamente grande (40-60 μm). Ao contrário do rápido crescimento do conhecimento em megacaripoiesis na biologia celular e no nível molecular, a caracterização da megacariopoiese por citometria de fluxo limita-se à identificação de MKs maduros usando marcadores de superfície específicos da linhagem, enquanto os estágios anteriores de diferenciação de MK permanecem inexplorados. Aqui, apresentamos uma estratégia de imunofenofoteping que permite a identificação de estágios sucessivos de diferenciação de MK, com status ploidy crescente, em fontes primárias humanas ou culturas in vitro com um painel integrando marcadores de superfície específicos e não específicos de MK. Apesar de seu tamanho e fragilidade, os MKs podem ser imunofenótipados usando o painel acima mencionado e enriquecidos pela triagem celular ativada pela fluorescência em condições específicas de pressão e diâmetro do bocal. Essa abordagem facilita estudos multi-Omics, com o objetivo de entender melhor a complexidade da megacariopoiese e da produção de plaquetas em humanos. Uma melhor caracterização da megacaritopoiese pode representar fundamental no diagnóstico ou prognóstico de patologias e malignidade relacionadas à linhagem.