Kirurgi och provbehandling för korrelativ avbildning av murinpulmonellventilen

De underliggande orsakerna till hjärtklaff relaterade-sjukdom (HVD) är svårfångade. Murine djurmodeller är ett utmärkt verktyg för att studera HVD, men den kirurgiska och instrumentella expertis som krävs för att exakt kvantifiera strukturen och organisationen över flera längdskalor har hämmat dess framsteg. Detta arbete ger en detaljerad beskrivning av murin dissekering, en block färgning, prov bearbetning och korrelativa bildframställning förfaranden för att avbilda hjärtklaffen i olika längdskalor. Hydrostatiskt transvalvulärt tryck användes för att kontrollera temporal heterogenitet genom att kemiskt fixa hjärtklaffen konformation. Mikrotomografi (μCT) användes för att bekräfta hjärtklaffens geometri och ge en referens för den nedströms provbehandling som behövs för seriell block ansiktsskanning elektronmikroskopi (SBF-SEM). Högupplösta seriella SEM-bilder av den extracellulära matrisen (ECM) togs och rekonstruerades för att ge en lokal 3D-representation av sin organisation. μCT och SBF-SEM bildframställning metoder var sedan korrelerade för att övervinna rumsliga variationen över pulmonell ventilen. Även om det arbete som presenteras uteslutande är på lungventilen, kan denna metodik antas för att beskriva den hierarkiska organisationen i biologiska system och är avgörande för den strukturella karakteriseringen över flera längdskalor.