使用 1-Cyano-4-二甲基亚胺四氟化物 （CDAP） 激活和结合可溶性聚糖

结合疫苗是疫苗学的显著进步。对于多糖结合疫苗的制备，多糖可以方便地功能化，并使用1-氰化物-4-二甲基丙胺四氟溴酸酯（CDAP）与疫苗载体蛋白连接，这是一种易于处理的氰化物试剂。CDAP 通过在 pH 7-9 中与碳水化合物羟基组发生反应来激活多糖。CDAP 的稳定性和反应性高度依赖 pH 值。由于CDAP的水解作用，反应的pH值在激活过程中也会降低，这使得良好的pH值控制成为可重复激活的关键。原始 CDAP 激活协议是在室温下以未缓冲的 pH 9 解决方案执行的。

由于在这种情况下（<3分钟）下快速反应，以及伴随快速CDAP水解的快速pH值下降，在短时间内快速调整和维持目标反应pH值是很困难。此处描述的改进协议在 0 °C 下执行，可减慢 CDAP 水解速度，并将激活时间从 3 分钟延长至 ±15 分钟。二甲基亚胺（DMAP）也被用作缓冲，在添加CDAP试剂之前，预先调整多糖溶液到目标激活pH值。反应时间越长，加上 CDAP 水解速度较慢，以及使用 DMAP 缓冲器，使得在整个激活过程的整个持续时间内保持激活 pH 值更加容易。改进的协议使激活过程不那么狂热，更易重复，更易于扩展。