Direkte påvisning af isolevuglandiner i væv under anvendelse af et D11 scFv-alkalisk fosfatasefusionsprotein og immunofluorescens

Isolevuglandiner (IsoLG'er) er stærkt reaktive gamma ketoaldehyder dannet af H2-isoprostaner gennem lipidperoxidering og tværbundne proteiner, der fører til betændelse og forskellige sygdomme, herunder hypertension. Påvisning af IsoLG-akkumulering i væv er afgørende for at kaste lys over deres involvering i sygdomsprocesserne. Måling af IsoLG'er i væv er imidlertid ekstremt vanskelig, og de nuværende tilgængelige værktøjer, herunder massespektrometrianalyse, er besværlige og ekstremt dyre. Her beskriver vi en ny metode til in situ-påvisning af IsoLG'er i væv ved anvendelse af alkalisk fosfatase-konjugeret D11 ScFv og et rekombinant fagdisplay-antistof produceret i E. coli ved immunofluorescerende mikroskopi. Fire kontroller blev brugt til validering af farvningen: (1) farvning med og uden D11, (2) farvning med bakterielt periplasmatisk ekstrakt med den alkaliske fosfataselinker, (3) irrelevant scFV-antistoffarvning og (4) konkurrencedygtig kontrol med IsoLG før farvningen. Vi demonstrerer effektiviteten af den alkaliske fosfatase-konjugerede D11 i både humant væv og musevæv med eller uden hypertension. Denne metode vil sandsynligvis tjene som et vigtigt redskab til at studere IsoLGs rolle i en lang række sygdomsprocesser.