密度梯度超速离心研究哺乳动物细胞内吞循环

内体运输是调节各种生物事件的重要细胞过程。蛋白质从质膜内化，然后运输到早期内体。内化的蛋白质可以转运到溶酶体进行降解或再循环回质膜。需要一个强大的内吞循环途径来平衡膜材料从内吞作用中的去除。据报道，各种蛋白质可以调节该途径，包括ADP-核糖基化因子6（ARF6）。密度梯度超速离心是细胞分级分离的经典方法。离心后，将细胞器沉淀在其等光表面。这些馏分被收集并用于其他下游应用。这里描述的是使用密度梯度超速离心从转染的哺乳动物细胞中获取回收的含内体部分的方案。对分离的馏分进行标准的蛋白质印迹以分析其蛋白质含量。通过采用该方法，我们发现吞噬和细胞动力1（ELMO1）的质膜靶向，一种与Ras相关的C3肉毒杆菌毒素底物1（Rac1）鸟嘌呤核苷酸交换因子，是通过ARF6介导的内吞循环。