Rekonstruera humant retinoblastom in vitro

Mänsklig RB är barncancer, som är dödlig om ingen behandling ges. Eftersom RB härstammar från konprekursorer, vilket är relativt sällsynt i gnagarmodeller, är det under tiden när det gäller skillnaderna mellan arter mellan människor och gnagare, en sjukdomsmodell som härrör från människor mer fördelaktig för att avslöja mekanismerna för mänsklig RB och söka terapimålen. Häri beskriver protokollet genereringen av två genredigerade hESC-linjer med en biallelic RB1-punktmutation (RB1 Mut/^Mut) respektive en RB1 knockout-mutation (RB1-^/-). Under processen med retinal utveckling observeras bildandet av RB. RB-cellinjerna etableras också genom att separera från RB-organoiderna. Sammantaget, genom att differentiera de genredigerade hESC-linjerna i retinala organoider med hjälp av ett 2D- och 3D-kombinerat differentieringsprotokoll, har vi framgångsrikt rekonstruerat den mänskliga RB i en maträtt och identifierat dess kon-föregångare ursprung. Det skulle ge en användbar sjukdomsmodell för att observera retinoblastomens uppkomst, proliferation och tillväxt samt vidareutveckla nya terapeutiska medel.