Toepassing van CRISPR-interferentie (CRISPRi) voor genuitschakeling bij pathogene soorten leptospira

Leptospirose is een wereldwijde verwaarloosde zoönose, verantwoordelijk voor ten minste 1 miljoen gevallen per jaar en bijna 60 duizend sterfgevallen. De ziekte wordt veroorzaakt door pathogene en virulente bacteriën van het geslacht Leptospira, hetzij door direct contact met de bacterie, hetzij indirect door blootstelling aan besmet water of bodem. Huisdieren en wilde dieren fungeren als reservoirhosts van infectie en werpen leptospiren van gekoloniseerde niertubuli van de nier, via urine, in het milieu. De generatie van mutante stammen van Leptospira is van cruciaal belang om pathogene mechanismen van infectie te evalueren en te begrijpen. CRISPR-interferentie (CRISPRi) is een eenvoudig, betaalbaar en specifiek hulpmiddel gebleken voor genuitschakeling bij pathogene Leptospira. Daarom zullen de methodologische details van het verkrijgen van de plasmideconstructies die zowel dCas9 als guide RNA bevatten, de levering van plasmiden aan Leptospira door vervoeging met de E. coli stam β2163, en transconjugant herstel en evaluatie, worden beschreven. Bovendien maken de onlangs beschreven Hornsby-Alt-Nally (HAN) media de relatief snelle isolatie en selectie van mutante kolonies op agarplaten mogelijk.