Проточный цитометрический анализ биомаркеров апоптоза в клетках рака шейки матки SiHa, обработанных актиномицином D

Биомаркеры апоптоза были исследованы в клетках рака шейки матки SiHa, обработанных актиномицином D, с использованием настольного проточного цитометра. Ранние биомаркеры (аннексин V и мембранный потенциал митохондрий) и поздние биомаркеры (каспазы 3 и 7 и повреждение ДНК) апоптоза были измерены в экспериментальных и контрольных культурах. Культуры инкубировали в течение 24 часов в увлажненном инкубаторе при 37 °C с содержанием_СО2 5%. Затем клетки отделяли с помощью трипсина и подсчитывали с помощью проточного цитометрического анализа количества клеток. Клетки были дополнительно проанализированы на апоптоз с использованием анализа Annexin V, анализа митохондриального электрохимического трансмембранного потенциала, анализа каспазы 3/7 и анализа повреждения ДНК. В этой статье представлен обзор апоптоза и традиционной проточной цитометрии, а также разработаны протоколы проточной цитетрии для обработки и анализа клеток SiHa. Результаты описывают положительные, отрицательные и субоптимальные экспериментальные данные. Также обсуждаются интерпретация и предостережения при проведении проточного цитометрического анализа апоптоза с использованием этой аналитической платформы. Проточный цитометрический анализ обеспечивает точное измерение ранних и поздних биомаркеров апоптоза.