Рассечение планарийных яичников для ультраструктурного анализа и окрашивания антителами

Доступность половых клеток позволяет изучать развитие зародышевых клеток, мейоз и рекомбинацию. Половой биотип пресноводной планарии, Schmidtea mediterranea, является мощной моделью беспозвоночных для изучения эпигенетической спецификации половых клеток. В отличие от большого количества яичек и мужских половых клеток, ооциты планарий относительно трудно обнаружить и исследовать, так как существует только два яичника, каждый из которых содержит 5-20 ооцитов. Более глубокая локализация в теле планарий и отсутствие защитных эпителиальных тканей также затрудняют непосредственное вскрытие яичников планарий.

В этом протоколе используется короткий этап фиксации для облегчения локализации и препарирования планарных яичников для последующего анализа для преодоления этих трудностей. Рассеченный яичник совместим для ультраструктурного исследования методом просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ) и иммуноокрашивания антителами. Метод препарирования, описанный в этом протоколе, также позволяет проводить эксперименты по возмущению генов, в которых яичники исследуются в различных условиях РНК-интерференции (РНК-интерференции). Прямой доступ к интактным половым клеткам в яичнике, достигаемый с помощью этого протокола, значительно улучшит глубину и качество визуализации и позволит проводить клеточные и субклеточные исследования биологии ооцитов.