PiggyActivoBac Transformación de la línea germinal mediada por transposasa en el gusano cogollero, Spodoptera frugiperda

La inserción estable de carga genética en los genomas de insectos utilizando elementos transponibles es una herramienta poderosa para estudios genómicos funcionales y el desarrollo de estrategias genéticas de manejo de plagas. El elemento transponible más utilizado en la transformación de insectos es piggyBac,y la transformación de la línea germinal basada en piggyBacse ha llevado a cabo con éxito en insectos modelo. Sin embargo, todavía es un desafío emplear esta tecnología en insectos no modelo que incluyen plagas agrícolas. Este artículo informa sobre la transformación de la línea germinal de una plaga agrícola global, el gusano cogollero (FAW), Spodoptera frugiperda,utilizando la transponasa hiperactiva piggyBac (hyPBase).

En este trabajo, el ARNm hyPBase fue producido y utilizado en lugar del plásmido ayudante en microinyecciones embrionarias. Este cambio condujo a la generación exitosa de FAW transgénicos. Además, también se describen los métodos de cribado de animales transgénicos, la detección rápida basada en PCR de la inserción de transgenes y la determinación del sitio de integración basada en PCR entrelazada asimétrica térmica (TAIL-PCR). Por lo tanto, este trabajo presenta un protocolo para producir FAW transgénico, que facilitará la transgénesis basada en piggyBacen FAW y otros insectos lepidópteros.