A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Abstract
Environment
הפקת קופקטור F420 לניתוח אורך זנב פוליגלוטאמט מתרבויות טהורות מתנוגניות ודגימות סביבתיות
Abstract
ה- F420 של קופקטור ממלא תפקיד מרכזי כנשא הידריד בחילוף החומרים העיקרי והמשני של מסה חיידקית וארכאלית רבים. קופקטור ידוע בעיקר בשל תפקידו במתנוגנזה, שם הוא מקל על תגובות קשות תרמודינמית. כמו הזנב polyglutamate משתנה באורך בין אורגניזמים שונים, ניתוחי פרופיל אורך עשוי להיות כלי רב עוצמה להבחנה ואפיון קבוצות שונות מסלולים בבתי גידול שונים. כאן, הפרוטוקול מתאר את החילוץ והאופטימיזציה של זיהוי F420 קופקטור על ידי החלת מיצוי שלב מוצק בשילוב עם ניתוח כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים ללא תלות בגישות ביולוגיות תרבותיות או מולקולריות. השיטה יושמה כדי לקבל מידע נוסף על הביטוי של קופקטור F420 מקהילות מיקרוביות בקרקעות, בוצה אנאירובית, ותרבויות טהורות, והוערכה על ידי ניסויים spiking. ובכך, המחקר הצליח לייצר פרופילים שונים באורך הזנב F420 עבור מתנוגנים מימנוטרופיים ואצטוקלסטיים בתרבויות טהורות מתנוגניות מבוקרות, כמו גם מדגימות סביבתיות כגון בוצה מעכל אנאירובי ואדמה.
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved