Studier av förkläde-cokaperoninteraktioner med homogen pärlbaserad analys

Inriktning på värmechockprotein 90 (Hsp90)-cochaperone interaktioner ger möjlighet att specifikt reglera Hsp90-beroende intracellulära processer. Den bevarade MEEVD pentapeptiden vid C-ändstationen i Hsp90 är ansvarig för interaktionen med tetratricopeptidrepetitionsmotivet (TPR) av co-chaperones. FK506-bindande protein (FKBP) 51 och FKBP52 är två liknande TPR-motiv co-chaperones inblandade i steroidhormon-beroende sjukdomar med olika funktioner. Att identifiera molekyler som specifikt blockerar interaktioner mellan Hsp90 och FKBP51 eller FKBP52 ger därför en lovande terapeutisk potential för flera mänskliga sjukdomar. Här beskriver vi protokollet för en förstärkt luminescent närhet homogen analys för sond interaktioner mellan Hsp90 och dess partner co-chaperones FKBP51 och FKBP52. För det första har vi renat TPR-motivinnehållande proteiner FKBP51 och FKBP52 i glutation S-transferase (GST)-märkt form. Med hjälp av glutation-kopplade donatorpärlor med GST-smälta TPR-motiv proteiner och acceptor pärlor i kombination med en 10-mer C-terminal peptid av Hsp90, har vi sonderat protein-protein interaktioner i en homogen miljö. Vi har använt denna analys för att screena små molekyler för att störa Hsp90-FKBP51 eller Hsp90-FKBP52 interaktioner och identifierat potenta och selektiva Hsp90-FKBP51 interaktionshämmare.