Analisi dei prodotti di scissione della famiglia Transforming Growth Factor ß secreti nel blastocoelo di embrioni di Xenopus laevis

I due bracci della superfamiglia del fattore di crescita trasformante ß (Tgfß), rappresentati rispettivamente dai ligandi Tgfß/nodali o della proteina morfogenetica ossea (Bmp), svolgono ruoli essenziali nello sviluppo embrionale e nell'omeostasi adulta. I membri della famiglia Tgfß sono fatti come precursori inattivi che dimerizzano e si piegano all'interno del reticolo endoplasmatico. Il precursore viene successivamente scisso in frammenti di ligando e prodominio. Sebbene solo il ligando dimerico possa coinvolgere i recettori Tgfß e attivare la segnalazione a valle, vi è un crescente riconoscimento che la parte del prodominio contribuisce all'attività del ligando. Questo articolo descrive un protocollo che può essere utilizzato per identificare i prodotti di scissione generati durante l'attivazione delle proteine precursori di Tgfß. L'RNA che codifica per i precursori di Tgfß viene prima microiniettato negli embrioni di X. laevis. Il giorno seguente, i prodotti di scissione vengono raccolti dal blastocoele degli embrioni allo stadio di gastrula e analizzati su macchie occidentali. Questo protocollo può essere completato in tempi relativamente brevi, non richiede reagenti costosi e fornisce una fonte di prodotti concentrati di scissione Tgfß in condizioni fisiologiche.