In vivo Dépistage de l’immunogénicité des vésicules extracellulaires dérivées de tumeurs par cytométrie en flux de lymphocytes T spléniques

La mort cellulaire immunogène des tumeurs, causée par la chimiothérapie ou l’irradiation, peut déclencher des réponses des lymphocytes T spécifiques à la tumeur en libérant des modèles moléculaires associés au danger et en induisant la production d’interféron de type I. Les immunothérapies, y compris l’inhibition des points de contrôle, reposent principalement sur des cellules T préexistantes spécifiques à la tumeur pour déployer un effet thérapeutique. Ainsi, les approches thérapeutiques synergiques qui exploitent la mort cellulaire immunogène comme vaccin anticancéreux intrinsèque peuvent améliorer leur réactivité. Cependant, le spectre des facteurs immunogènes libérés par les cellules soumises à un stress induit par le traitement reste incomplètement caractérisé, en particulier en ce qui concerne les vésicules extracellulaires (VE). Les VE, des particules membraneuses à l’échelle nanométrique émises par pratiquement toutes les cellules, sont considérés comme facilitant la communication intercellulaire et, dans le cancer, il a été démontré qu’ils médient l’amorçage croisé contre les antigènes tumoraux. Pour évaluer l’effet immunogène des VE dérivés de tumeurs dans diverses conditions, des méthodes adaptables, évolutives et valides sont recherchées. Par conséquent, une approche relativement simple et robuste est présentée ici pour évaluer l’immunogénicité in vivo des VE. Le protocole est basé sur l’analyse par cytométrie en flux des lymphocytes T spléniques après l’immunisation in vivo de souris avec des VE, isolées par des tests basés sur les précipitations à partir de cultures de cellules tumorales sous thérapie ou dans des conditions d’état d’équilibre. Par exemple, ces travaux montrent que l’exposition à l’oxaliplatine des cellules de mélanome murin B16-OVA a entraîné la libération de VE immunogènes qui peuvent servir de médiateur dans l’activation des lymphocytes T cytotoxiques réactifs à la tumeur. Par conséquent, le dépistage des VE par immunisation in vivo et cytométrie en flux identifie les conditions dans lesquelles les VE immunogènes peuvent émerger. L’identification des conditions de libération immunogène des VE fournit une condition préalable essentielle pour tester l’efficacité thérapeutique des VE contre le cancer et explorer les mécanismes moléculaires sous-jacents afin de dévoiler de nouvelles perspectives sur le rôle des VE dans l’immunologie du cancer.