Un modelo esferoide tridimensional para investigar la interacción tumor-estroma en el carcinoma hepatocelular

La agresividad y la falta de tratamientos bien tolerados y ampliamente efectivos para el carcinoma hepatocelular avanzado (CHC), la forma predominante de cáncer de hígado, racionalizan su rango como la segunda causa más común de muerte relacionada con el cáncer. Los modelos preclínicos deben adaptarse para recapitular las condiciones humanas para seleccionar los mejores candidatos terapéuticos para el desarrollo clínico y ayudar a la entrega de medicina personalizada. Los modelos de esferoides celulares tridimensionales (3D) son prometedores como una alternativa in vitro emergente a los cultivos monocapa bidimensionales (2D). Aquí, describimos un modelo esferoide tumoral 3D que explota la capacidad de las células individuales para agregarse cuando se mantiene en gotas colgantes, y es más representativo de un entorno in vivo que las monocapas estándar. Además, los esferoides 3D se pueden producir mediante la combinación de células homotípicas o heterotípicas, que reflejan más la heterogeneidad celular in vivo, lo que potencialmente permite el estudio de las interacciones ambientales que pueden influir en la progresión y las respuestas al tratamiento. La investigación actual optimizó la densidad celular para formar esferoides tumorales homotípicos y heterotípicos en 3D mediante la inmovilización de suspensiones celulares en las tapas de las placas de Petri estándar de 10 ^cm3 . Se realizó un análisis longitudinal para generar curvas de crecimiento de esferoides homotípicos versus heterotípicos tumorales/fibroblastos. Finalmente, se investigó el impacto proliferativo de los fibroblastos (células COS7) y los miofibroblastos hepáticos (LX2) sobre los esferoides tumorales homotípicos (Hep3B). Una densidad de siembra de 3.000 células (en medios de 20 μL) produjo con éxito esferoides heterotípicos Huh7 /COS7, que mostraron un aumento constante de tamaño hasta el día 8 del cultivo, seguido de retraso del crecimiento. Este hallazgo fue corroborado utilizando esferoides homotípicos Hep3B cultivados en medio condicionado (CM) LX2 (línea celular estrellada hepática humana). LX2 CM desencadenó la proliferación de esferoides Hep3B en comparación con los esferoides tumorales de control. En conclusión, este protocolo ha demostrado que los esferoides tumorales 3D se pueden utilizar como una herramienta in vitro simple, económica y de preselección para estudiar las interacciones tumor-estroma de manera más integral.