Denne forskning blev støttet af Grant 109-2313-B-005 -048 -MY3 fra Ministeriet for Videnskab og Teknologi (MOST).

BEMÆRK: Hele rutediagrammet er vist i figur 1.
1. Isolering og udvælgelse af potentielle entomopatogene svampe (EPF)
<ol><li>Saml jordprøven<ol>
<li>Fjern 1 cm af overfladejorden, og saml derefter jorden inden for 5-10 cm dybden ved hjælp af en skovl fra hvert prøvetagningssted. BEMÆRK:Prøvetagningssteder ville være et bjerg, en skov eller tyndt befolkede områder for at undgå forurening af kunstigt sprøjtede EPF-stammer. Sørg for, at arealer til o...

Entomopatogene svampe (EPF) er blevet anvendt til insektbekæmpelse. Der er flere metoder til at isolere, vælge og identificere EPF30,31,32. Ved at sammenligne de forskellige typer insekt agn metoder, Beauveria bassiana og Metarhizium anisopliae var almindeligt forekommende i insekt lokkemad6,12,13,14.<sup ...

I øjeblikket er entomopatogene svampe (EPF) meget udbredt i den mikrobielle kontrol af landbrugs-, skov- og gartneri skadedyr. Fordelene ved EPF er dens brede udvalg, god miljømæssig tilpasningsevne, miljøvenlig natur, og at den kan bruges sammen med andre kemikalier for at vise den synergistiske effekt for integreret skadedyrsbekæmpelse1,2. Til påføring som skadedyrsbekæmpelsesmiddel er det nødvendigt at isolere et stort antal EPF fra enten syge insekter eller det naturlige miljø.
Prøveudtagningen af disse organismer fra deres værter hjælper med at forstå den geografiske fordeling og prævalens af EPF i naturlige værter3,4,5. Imidlertid er samlingen af svampeinficerede insekter normalt begrænset af miljømæssige faktorer og insektpopulationer i marken4. I betragtning af at insekt værter vil dø efter EPF-infektion og derefter falde i jorden, isolering af EPF fra jordprøver kan være en stabil ressource3,6. For eksempel er saprofitter kendt for at bruge den døde vært som deres ressource til vækst. Jord agn og selektive medium systemer er blevet meget brugt til at opdage og isolere EPF fra jorden3,4,7,8,9,10.
I den selektive mediummetode er den fortyndede jordopløsning belagt på et medium, der indeholder bredspektrede antibiotika (f.eks. chloramphenicol, tetracyklin eller streptomycin) for at hæmme væksten af bakterier2,3,9,11. Det er dog blevet rapporteret, at denne metode kan fordreje stammens mangfoldighed og tæthed og kan forårsage en over- eller undervurdering af mange mikrobielle samfund6. Desuden er de isolerede stammer mindre patogene og konkurrerer med saprofytter under isolation. Det er vanskeligt at isolere EPF fra den fortyndede jordopløsning3. I stedet for at bruge et selektivt medium isolerer jord agnmetoden EPF fra de inficerede døde insekter, som kan opbevares i 2-3 uger, hvilket giver en mere effektiv og standard EPF-adskillelsesmetode3,4,7,6. Fordi metoden er let at betjene, kan man isolere en række patogene stammer til en lav pris4. Derfor er det meget udbredt af mange forskere.
Ved sammenligning af de forskellige typer af insekt agn systemer, Beauveria bassiana og Metarhizium anisopliae er de mest almindelige EPF arter, der findes i insekter, der tilhører Hemiptera, Lepidoptera, Blattella, og Coleoptera6,12,13,14. Blandt disse insekt lokkemad, Galleria mellonella (bestil Lepidoptera) og Tenebrio molitor (ordre Coleoptera) viser højere inddrivelse satser beauveria og Metarhizium spp., sammenlignet med andre insekter. Derfor er G. mellonella og T. molitor almindeligt anvendt til insekt baiting. I årenes løb har United States Department of Agriculture (USDA) etableret et EPF-bibliotek (Agricultural Research Service Collection of EPF cultures, ARSEF), der indeholder en bred vifte af arter, herunder 4081 arter af Beauveria spp., 18 arter af Clonostachys spp., 878 arter af Cordyceps spp., 2473 arter af Metarhizium spp., 226 arter af Purpureocillium spp., og 13 arter af Pochonia spp. blandt andre15. Et andet EPF-bibliotek blev bygget af Entomology Research Laboratory (ERL) fra University of Vermont i USA i ca. 30 år. Det omfatter 1345 stammer af EPF fra USA, Europa, Asien, Afrika og Mellemøsten16.
For at kontrollere lokale eller invasion skadedyr i Taiwan, isolation og udvælgelse af indfødte EPF er påkrævet. Derfor har vi i denne protokol ændret og beskrevet proceduren for jordens agnmetode og kombineret den med insekt agn (melorme, Tenebrio molitor) system17. På grundlag af denne protokol blev der oprettet et EPF-bibliotek. Der blev udført to screeningsrunder (kvantificering af podning) for de foreløbige EPF-isolater. EPF-isolater viste sygdomsfremkaldende for insekter. De potentielle stammer blev udsat for morfologiske og molekylære identifikationer og yderligere analyseret af termotolerance og konidial produktion assay. Desuden blev der også foreslået et begreb om et effektivt conidianummer (ECN). Ved hjælp af ECN-formel og hovedkomponentanalyse (PCA) blev de potentielle stammer analyseret under simuleret miljøtryk for at fuldføre processen med at etablere og screene EPF-biblioteket. Efterfølgende blev patogenitet af lovende EPF-stammer testet for mål skadedyr (f.eks Spodoptera litura). Den nuværende protokol integrerer termotolerance- og konidiale produktionsdata i ECN-formlen og PCA-analysen, som kan bruges som standardrangeringssystem for EPF-relateret forskning.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar Bacteriological grade</td>
			<td>BIOMAN SCIENTIFIC Co., Ltd.</td>
			<td>AGR001</td>
			<td>Suitable in most cell culture/molecular, biology applications.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AGAROSE, Biotechnology Grade</td>
			<td>BIOMAN SCIENTIFIC Co., Ltd.</td>
			<td>AGA001</td>
			<td>For DNA electrophoresis.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioGreen Safe DNA Gel Buffer</td>
			<td>BIOMAN</td>
			<td>SDB001T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brass cork borer</td>
			<td>Dogger</td>
			<td>D89A-44001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Canon kiss x2</td>
			<td>Canon</td>
			<td>EOS 450D</td>
			<td>For record strain colony morphology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant temperature incubator</td>
			<td>Yihder Co., Ltd.</td>
			<td>LE-509RD</td>
			<td>Fungal keeping.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cubee Mini-Centrifuge</td>
			<td>GeneReach</td>
			<td>MC-CUBEE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DigiGel 10 Digital Gel Image System</td>
			<td>TOPBIO</td>
			<td>DGIS-12S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Finnpipette F2 0.2 to 2 &#181;L Pipette</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>4642010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Finnpipette F2 1 to 10 &#181;L Pipette</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>4642030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Finnpipette F2 10 to 100 &#181;L Pipette</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>4642070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Finnpipette F2 100 to 1000 &#181;L Pipette</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>4642090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Finnpipette F2 2 to 20 &#181;L Pipette</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>4642060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Finnpipette F2 20 to 200 &#181;L Pipette</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>4642080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GeneAmp PCR System 9700</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4342718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenepHlow Gel/PCR Kit</td>
			<td>Geneaid</td>
			<td>DFH100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Genius Dry Bath Incubator</td>
			<td>Major Science</td>
			<td>MD-01N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graduated Cylinder Custom A 100mL</td>
			<td>SIBATA</td>
			<td>SABP-1195906</td>
			<td>Measure the volume of reagents.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hand tally counter</td>
			<td>SDI</td>
			<td>NO.1055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>bioman</td>
			<td>AP-0650010</td>
			<td>Calculate the number of spore</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inoculating loop</td>
			<td>Dogger</td>
			<td>D8GA-23000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lid</td>
			<td>IDEAHOUSE</td>
			<td>RS92004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro cover glass</td>
			<td>MUTO PURE CHEMICALS CO.,LTD</td>
			<td>24241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope imaging system</td>
			<td>SAGE VISION CO.,LTD</td>
			<td>SGHD-3.6C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>DOGGER</td>
			<td>DG75001-07105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mupid-2plus DNA Gel Electrophoresis</td>
			<td>ADVANCE</td>
			<td>AD110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon optical microscope</td>
			<td>SAGE VISION CO.,LTD</td>
			<td>Eclipse CI-L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic cup</td>
			<td>IDEAHOUSE</td>
			<td>CS60016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Presto Mini gDNA Yeast Kit</td>
			<td>Geneaid</td>
			<td>GYBY300</td>
			<td>Fungal genomic DNA extraction kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sabouraud Dextrose Broth (Sabouraud Liquid Medium)</td>
			<td>HiMedia Leading BioSciences Company</td>
			<td>M033</td>
			<td>Used for cultivation of yeasts, moulds and aciduric microorganisms.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade No.23</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle No.4</td>
			<td>AGARWAL SURGICALS</td>
			<td>SSS -FOR-01-91</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shovel</td>
			<td>Save &#38; Safe</td>
			<td>A&#160;-1580242&#160;-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silwet L-77</td>
			<td>bioman(phytotech)</td>
			<td>S7777</td>
			<td>Surfactant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall Legend Micro 17 Microcentrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75002403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel Tweezers</td>
			<td>SIPEL ELECTRONIC SA</td>
			<td>GG-SA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Petri Dish</td>
			<td>BIOMAN SCIENTIFIC Co., Ltd.</td>
			<td>1621</td>
			<td>Shallow cylindrical containers with fitted lids, specifically for microbiology or cell culture use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThermoCell MixingBlock</td>
			<td>BIOER</td>
			<td>MB-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 80</td>
			<td>FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation</td>
			<td>164-21775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TwinGuard ULT Freezer</td>
			<td>Panasonic Healthcare Holdings Co., Ltd.</td>
			<td>MDF-DU302VX</td>
			<td>-80&#176;C sample stored.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical floor type cabinet</td>
			<td>Chih Chin</td>
			<td>BSC-3</td>
			<td>Fungal operating culturing.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Genie II</td>
			<td>Scientific</td>
			<td>SIG560</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zipper storage bags</td>
			<td>Save &#38; Safe</td>
			<td>A&#160;-1248915&#160;-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 bp DNA Ladder</td>
			<td>Geneaid</td>
			<td>DL007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-20&#176;C Freezer</td>
			<td>FRIGIDAIRE</td>
			<td>Frigidaire FFFU21M1QW</td>
			<td>-20&#176;C sample and experimental reagents stored.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2X SuperRed PCR Master Mix</td>
			<td>TOOLS</td>
			<td>TE-SR01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50X TAE Buffer</td>
			<td>BIOMAN</td>
			<td>TAE501000</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and selection of entomopathogenic fungi from soil samples and evaluation of fungal virulence against insect pests

Entomopatogene svampe (EPF) er et af de mikrobielle kontrolmidler til integreret skadedyrsbekæmpelse. For at kontrollere lokale eller invasive skadedyr er det vigtigt at isolere og vælge indfødte EPF. Derfor blev jord agnmetoden kombineret med insekt agn (melorme, Tenebrio molitor) system brugt i denne undersøgelse med nogle ændringer. Den isolerede EPF blev derefter underkastet virulenstesten mod landbrugs skadedyret Spodoptera litura. Desuden blev de potentielle EPF-stammer udsat for morfologiske og molekylære identifikationer. Desuden blev conidia-produktionen og termotoleranceanalysen udført for de lovende EPF-stammer og sammenlignet; disse data blev yderligere erstattet af formlen for effektivt conidianummer (ECN) for laboratorierangering. Jord agn-melorme system og ECN formel kan forbedres ved at erstatte insektarter og integrere flere stressfaktorer til evaluering af kommercialisering og anvendelse af marken. Denne protokol giver en hurtig og effektiv tilgang til EPF-udvælgelse og vil forbedre forskningen i biologiske kontrolmidler.

Isolering og udvælgelse af potentielle entomopatogene svampe (EPF) Ved at anvende den Tenebrio molitormedierede entomopathogenic fungi (EPF) bibliotekskonstruktionsmetode ville antallet af svampe uden insektdræbende aktivitet blive udelukket; således kan isolationseffektiviteten og udvælgelsen af EPF øges i vid udstrækning. Under anvendelsen af denne metode blev der registreret oplysninger om prøvetagningssteder, jordprøver og svampespiringshastighede...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Selection of Entomopathogenic Fungi from Soil Samples and Evaluation of Fungal Virulence against Insect Pests at JoVE.com

Isolation and Selection of Entomopathogenic Fungi from Soil Samples and Evaluation of Fungal Virulence against Insect Pests

Her præsenterer vi en protokol baseret på melorme (Tenebrio molitor)-agn system, der blev brugt til at isolere og vælge entomopathogene svampe (EPF) fra jordprøver. En effektiv conidia nummer (ECN) formel bruges til at vælge høj stresstolerant EPF baseret på fysiologiske egenskaber for skadedyr mikrobiel kontrol i marken.

Isolering og udvælgelse af entomopatogene svampe fra jordprøver og evaluering af svampe virulens mod skadedyr

Entomopathogenic fungi (EPF) are one of the microbial control agents for integrated pest management. To control local or invasive pests, it is important ...

Metoden til entomopatogen svampeisolation er vigtig for udviklingen af mikrobielle kontrolmidler. Denne protokol kan bruges til at isolere og vælge høj virulens entomopathogenic svampe isolater fra jordprøverne. Denne teknik omfatter tre ben af patogenitet screening og kombinerer termotolerance og conidia produktion assay at gøre den effektive conidia nummer ranking.Metoden kan hjælpe med at vælge høj virulens og lovende entomopathogenic nye svampe isolater til kommercialisering. Denne protokol fokuserer på biologisk kontrol, det kunne også bruges til at opdage de entomopatogene svampeisolater for at studere samspillet mellem skadedyr og entomopatogene svampe. Demonstrere proceduren vil være Yao-Chia Liu og Nian-Tong Ni, kandidatstuderende fra mit laboratorium.Start med indsamlingen af jordprøven ved at fjerne en centimeter af overfladejorden og derefter opsamle jorden inden for fem til 10 centimeter dybde fra hvert prøvetagningssted ved hjælp af en skovl. Efter at have registreret detaljerne på hvert prøveudtagningssted, indsamle og vedligeholde 100 gram jordprøve i en plastikpose ved stuetemperatur til at udføre svampe isolation protokol inden for tre timer. For at isolere de potentielle entomopatogene svampe, eller EPF, tilsættes 100 gram af jordprøven i en plastikkop og placerer fem Tenebrio molitor orme på jordens overflade ved stuetemperatur i mørke i to uger med observation og registrering af larvedødeligheden og mykosen dagligt.Hold den døde larve i koppen indtil to uger for svampeisolation. Efter to uger overføres de døde insekter til en ren bænk og bruger en steril tandstikker til at samle conidia. For at opnå den primære kultur af svampe, streak den indsamlede conidia på en kvart styrke Sabouraud dextrose agar medium eller SDA i en 55-millimeter plade til at inkubere ved 25 grader Celsius i syv dage.På den ottende dag, restreak hver primær kultur svampe på en 55-millimeter kvart styrke SDA plade i en laminar flow hætte før inkubation af kulturen på 25 grader Celsius i syv dage for at opnå enkelte kolonier af svampe. I den første patogenitetsscreening skal du placere fem Tenebrio molitor larver direkte på overfladen af hver ren svampekulturplade ved 25 grader Celsius. Efter at have observeret og registreret mykose og dødelighed i 10 dage, skal du vælge svampeisolater til yderligere analyse.For at udføre den anden virulenstest skal du høste conidiaen for hvert svampeisolat ved at hvirvle i et minut og tælle antallet af conidia ved hjælp af et hæmocytometer. Når det er gjort, justere conidia suspension til en koncentration på en gange 10 til 1/7 conidia per milliliter i en 0,03% overfladeaktiv opløsning, før spredning 10 mikroliter af svampe suspension på en 55-millimeter kvart styrke SDA plade til at vokse i syv dage ved 25 grader Celsius i mørke. På den ottende dag skal du placere fem Tenebrio molitor larver direkte på overfladen af hver ren svampekulturplade og forsegle pladerne med Parafilmfilm for at inkubere, mens du observerer mykosen og dødeligheden som beskrevet før.Efter at have gentaget den anden virulenstest i tredotel for hvert svampeisolat skal du vælge isolaterne for at udføre tredje virulenstest for mål skadedyr som Spodoptera litura. SDA-pladen med en kvadrat millimeter opsamles fra den syv dage lange SDA-plade for at udtrække det svampegenomiske DNA ved hjælp af et svampegenom dna-ekstraktionssæt. Dernæst forstærke svampen indre transskriberet spacer eller ITS region ved PCR af DNA-prøven efter PCR-programmet beskrevet i tekstmanuskriptet.Efter sekventering af pcr-forstærket produkt ved kommerciel sekventeringstjeneste skal du bruge NCBI BLAST til at søge efter lignende svampe i NCBI-databasen og vælge de relative svampearter til fylogenetisk analyse. Juster de mange sekvenser, og trim det bevarede sekvensområde manuelt med GeneDoc. Udfør den fylogenetiske analyse baseret på den minimale udvikling, nabo sammenføjning og maksimale sandsynlighedsmetoder.For at studere svampenes morfologi skal du fange svampekulturkoloniens vækst i syv dage med et kamera og registrere væksten, formen: fluffy eller fast og koloniernes farve. For at observere conidia i conidiophores, skrabe conidia fra den rene kultur svampe koloni med en podning loop og overføre sporer til et glas dias indeholdende 0,1% Tween 80 opløsning. Brug en skalpel til at skære en agar blok af svampekoloni og derefter overføre agar blok til et glas dias og tilsæt 0,1% Tween 80 løsning til at vaske det meste af den overskydende conidia på agar.Dæk derefter diaset med et dæksel for let mikroskopisk observation af conidia. Mål og registrere bredden og længden af conidia og conidiophores at sammenligne forskellen mellem forskellige svampe isolater. Arranger en konidial produktion assay ved dyrkning af den valgte svampe isolere på kvart styrke SDA medium på omkring 25 grader Celsius i mørke i 10 dage.Derefter forberede en milliliter konidial suspension af svampeisolat i 0,03% overfladeaktiv opløsning efterfulgt af justering af koncentrationen til en gange 10 til 1/7 conidia per milliliter som beskrevet før. Efter at have tilføjet tre dråber på 10 mikroliter af konidial suspension på en kvart styrke SDA plade, inkubere kulturen ved 25 grader Celsius i mørke i syv, 10 og 14 dage til at tælle sporulering af svampe. På hvert tidspunkt skal du løsne en fem millimeter agarblok fra midten af kolonien med en korkborer og overføre blokken til et 1,5 milliliter mikrocentrifugerør, der indeholder en milliliter af 0,03% overfladeaktiv opløsning.Efter hvirvlende røret på 3.000 rotationer i minuttet ved stuetemperatur i 15 minutter, skal du bruge et hæmocytometer til at tælle antallet af conidia. For termotolerance assay, kultur den valgte svampe isolere og forberede en gange 10 til 1/7 conidia per milliliter suspension som illustreret tidligere. Efter hvirvlen opvarmes den konidiale suspension i et tørt bad ved 45 grader Celsius i forskellige tidsintervaller.Post varme eksponering, tilføje tre dråber af fem mikroliter af konidial suspension på en 55-millimeter kvart styrke SDA plade på hvert tidspunkt og derefter inkubere pladerne på omkring 25 grader Celsius i 18 timer. For at bestemme spiringshastigheden tælles antallet af spirede konidiasporer med fem tilfældigt udvalgte felter under lysmikroskopet ved 200 gange forstørrelse. Beregn det samlede effektive conidianummer eller ECN ved hjælp af formlen, og beregn derefter principkomponentanalyse eller PCA af svampestammer som beskrevet i manuskriptet.Vælg de bedst præsterende svampestammer baseret på ECN eller PCA for at udføre virulenstesten af mål skadedyr. I den anden virulenstest blev virulensen af de 26 svampeisolater mod Tenebrio molitor melorme vurderet. 12 svampeisolater med høj patogenitet blev udvalgt til virulenstesten mod Spodoptera litura.For bedre at forstå svampeskattemæssig position blev 26 isolater fra den første screening for patogenitet underkastet molekylær analyse baseret på ITS-regionen. Gennem rengøringsmetoden for svampemorfologiske observationer kunne konstruktionerne af conidiophores ses tydeligt med 0,1% Tween 80 opløsning. Conidiaens farve, form og arrangement blev undersøgt gennem mikroskopiske observationer af conidiakolonien.ECN kombinerer conidia produktion og termotolerance data for hver EPF. Den høje levedygtighed af en svampestamme blev observeret, da ECN-værdien var høj. Der blev også afsløret en stor koordinering mellem EKP og ECN, hvilket tyder på, at ECN kunne anvendes til at evaluere hierarkiet af levedygtighedsrelaterede parametre.Den patogenesitet screening udvinding af svampe DNA og dyrkning af svampe isolate er vigtige i proceduren. Ved hjælp af ECN-beregningsformlen kan de ideelle interne patogene svampe vælges. Kombination af forskellige insektarter, såsom større voksmot og melorme sammen for at agn de entomopatogene svampe fra jordprøverne, kan øge mangfoldigheden af entomopatogene svampe.Jordens mikroorganismediversitet er et meget interessant emne under driften af denne protokol. Det kan også undersøges nærmere i fremtiden via denne protokol.

Isolering og udvælgelse af entomopatogene svampe fra jordprøver og evaluering af svampe virulens mod skadedyr

Abstract