Desenvolvimento de um modelo de co-cultura celular para imitar isquemia cardíaca/reperfusão in vitro

A doença isquêmica do coração é a principal causa de morte e incapacidade em todo o mundo. A reperfusão causa lesões adicionais além da isquemia. As células endoteliais (CES) podem proteger os cardiomiócitos (CMs) da lesão de reperfusão através de interações célula-células. Co-culturas podem ajudar a investigar o papel das interações célula-células. Uma cocultura mista é a abordagem mais simples, mas é limitada, pois tratamentos isolados e análises a jusante de tipos de células únicas não são viáveis. Para investigar se as CES podem atenuar os danos celulares cm dependentes de dose e se essa proteção pode ser ainda mais otimizada variando a distância de contato entre as duas linhas celulares, usamos células endotelias da artéria coronária primária do rato e cardiomiócitos de rato adulto para testar três tipos de inserções de cultura celular que variaram em sua distância de camada intercelular a 0,5, 1.0, e 2,0 mm, respectivamente. Somente em CMs, a lesão celular avaliada pela liberação de lactato desidrogenase (LDH) aumentou significativamente durante a hipóxia e ainda mais após a reoxigenação quando a distância foi de 2,0 mm em comparação com 0,5 e 1,0 mm. Quando as CES e os CMs estavam em contato quase direto (0,5 mm), houve apenas uma atenuação leve da lesão de reoxigenação de CMs após a hipóxia. Essa atenuação aumentou significativamente quando a distância espacial foi de 1,0 mm. Com 2,0 mm de distância, eCs atenuaram lesão cm durante hipoxia e hipóxia/reoxigenação, indicando que é necessário distanciamento cultural suficiente para os CES conversam com CMs, de modo que moléculas de sinal secretado possam circular e estimular totalmente caminhos de proteção. Nossos achados sugerem, pela primeira vez, que a otimização do ambiente espacial de co-cultura EC/CM é necessária para fornecer um modelo in vitro favorável para testar o papel das CE na proteção de CM contra lesões simuladas de isquemia/reperfusão. O objetivo deste relatório é fornecer uma abordagem passo a passo para que os investigadores usem este importante modelo a seu favor.