Visualisation de la dynamique des microtubules plus-end dans le modèle de la maladie de Huntington basé sur les fibroblastes de la peau primaire humaine

La transfection avec une protéine marqueur d’intérêt marquée par fluorescence en combinaison avec la microscopie vidéo time-lapse est une méthode classique d’étude des propriétés dynamiques du cytosquelette. Ce protocole offre une technique de transfection des fibroblastes primaires humains, ce qui peut être difficile en raison des spécificités des conditions de culture cellulaire primaire. De plus, le maintien des propriétés dynamiques du cytosquelette nécessite un faible niveau de transfection pour obtenir un bon rapport signal/bruit sans provoquer de stabilisation des microtubules. Il est important de prendre des mesures pour protéger les cellules du stress induit par la lumière et de la décoloration des colorants fluorescents. Au cours de nos travaux, nous avons testé différentes méthodes et protocoles de transfection ainsi que différents vecteurs afin de sélectionner la meilleure combinaison de conditions adaptées aux études de fibroblastes primaires humains. Nous avons analysé les vidéos time-lapse résultantes et calculé la dynamique des microtubules à l’aide d’ImageJ. La dynamique des extrémités plus des microtubules dans les différentes parties cellulaires n’est pas similaire, nous avons donc divisé l’analyse en sous-groupes - la région centrosome, la lamelle et la queue des fibroblastes. Notamment, ce protocole peut être utilisé pour l’analyse in vitro de la dynamique du cytosquelette dans les échantillons de patients, permettant la prochaine étape vers la compréhension de la dynamique des différents développements de la maladie.