Multifoton intravital avbildning for overvåking av leukocyttrekruttering under arteriogenese i en murine baklemmodell

Arteriogenese er sterkt avhengig av leukocytt- og blodplaterekruttering til det perivaskulære rommet av voksende sikkerhetsfartøy. Standard tilnærming for analyse av kollaterale arterier og leukocytter i arteriogenese er ex vivo (immun-) histologisk metodikk. Denne teknikken tillater imidlertid ikke måling av dynamiske prosesser som blodstrøm, skjærspenning, celle-celle-interaksjoner og partikkelhastighet. Dette papiret presenterer en protokoll for å overvåke in vivo-prosesser i voksende sikkerhetsarterier under arteriogenese ved bruk av intravital bildebehandling. Metoden beskrevet her er et pålitelig verktøy for dynamisk måling og tilbyr en høykontrastanalyse med minimal fotocytotoksisitet, levert ved multifotoneksitasjonsmikroskopi. Før analyse av voksende kollaterale arterier ble arteriogenese indusert i adduktormuskelen hos mus ved ensidig ligering av lårarterien.

Etter ligeringen begynte de eksisterende sikkerhetsarteriene å vokse på grunn av økt skjærspenning. Tjuefire timer etter operasjonen ble huden og subkutant fett over kollaterale arterier fjernet, og konstruerte en lomme for videre analyser. For å visualisere blodstrøm og immunceller under in vivo-avbildning, ble CD41-fluoresceinisotiocyanat (FITC) (blodplater) og CD45-phycoerythrin (PE) (leukocytter) antistoffer injisert intravenøst (i.v.) via et kateter plassert i halevenen til en mus. Denne artikkelen introduserer intravital multifotonavbildning som et alternativ eller in vivo komplement til de vanlige statiske ex vivo (immun-) histologiske analysene for å studere prosesser som er relevante for arteriogenese. Oppsummert beskriver dette papiret en ny og dynamisk in vivo-metode for å undersøke immuncellehandel, blodstrøm og skjærspenning i en bakkroppsmodell av arteriogenese, noe som forbedrer evalueringsmulighetene spesielt.