Une boîte à outils de transcription-traduction de streptomyces à haut rendement pour la biologie synthétique et les applications de produits naturels

Streptomyces spp. sont une source majeure d’antibiotiques cliniques et de produits chimiques industriels. Streptomyces venezuelae ATCC 10712 est une souche à croissance rapide et un producteur naturel de chloramphénicol, de jadomycine et de pikromycine, ce qui en fait un candidat attrayant en tant que châssis de biologie synthétique de nouvelle génération. Par conséquent, les outils génétiques qui accélèrent le développement de S. venezuelae ATCC 10712, ainsi que d’autres modèles Streptomyces spp., sont hautement souhaitables pour l’ingénierie et la découverte de produits naturels. À cette fin, un système dédié sans cellules S. venezuelae ATCC 10712 est fourni dans ce protocole pour permettre l’expression hétérologue à haut rendement des gènes G + C élevés (%) Ce protocole convient aux réactions par lots à petite échelle (10-100 μL) dans un format de plaque de 96 puits ou de 384 puits, tandis que les réactions sont potentiellement évolutives. Le système sans cellules est robuste et peut atteindre des rendements élevés (~ 5-10 μ M) pour une gamme de protéines recombinantes dans une configuration minimale. Ce travail intègre également un large ensemble d’outils plasmidiques pour la mesure en temps réel de la synthèse de l’ARNm et des protéines, ainsi que la coloration par fluorescence dans le gel des protéines marquées. Ce protocole peut également être intégré à des flux de travail de caractérisation de l’expression génique à haut débit ou à l’étude des voies enzymatiques des gènes G +C (%) élevés présents dans les génomes des Actinomycètes.