Karakterisering av nevromuskulære veikryss hos mus ved kombinert konfokal og superoppløsningsmikroskopi

Nevromuskulære veikryss (NMJs) er høyt spesialiserte synapser mellom lavere motorneuroner og skjelettmuskulaturfibre som spiller en viktig rolle i overføringen av molekyler fra nervesystemet til frivillige muskler, noe som fører til sammentrekning. De påvirkes i mange menneskelige sykdommer, inkludert arvelige nevromuskulære lidelser som Duchenne muskeldystrofi (DMD), medfødte myastheniske syndromer (CMS), spinal muskelatrofi (SMA) og amyotrofisk lateral sklerose (ALS). Derfor representerer overvåking av morfologien til nevromuskulære veikryss og deres endringer i sykdomsmusemodeller et verdifullt verktøy for patologiske studier og preklinisk vurdering av terapeutiske tilnærminger. Her beskrives metoder for merking og analyse av den tredimensjonale (3D) morfologien til de pre- og postsynaptiske delene av motoriske endeplater fra murine ertet muskelfibre. Prosedyrene for å klargjøre prøver og måle NMJ-volum, areal, tortuositet og aksonterminalmorfologi/belegg ved konfokal avbildning, og avstanden mellom postsynaptiske kryssfolder og acetylkolinreseptor (AChR) stripebredde ved superoppløsning stimulert emisjonsdeplesjon (STED) mikroskopi er detaljert. Endringer i disse NMJ-parametrene er illustrert hos mutante mus påvirket av SMA og CMS.