क्रिस्टल वायलेट का उपयोग दृश्य Cytopathic प्रभाव में सुधार करने के लिए-TCID50 Assays का उपयोग कर वायरल अनुमापन के लिए पठन आधारित

वायरल अनुमापन विषाणु विज्ञान अनुसंधान के लिए एक महत्वपूर्ण परख है। TCID50 assays और पट्टिका बनाने वाली इकाइयों (PFU) assays के माध्यम से साइटोपैथिक प्रभाव (सीपीई) का पता लगाना वायरस स्टॉक के टिटर की गणना करने के लिए दो मुख्य तरीके हैं और अक्सर विज़ुअलाइज़ेशन के लिए माइक्रोस्कोपी डिटेक्शन या सेल स्टेनिंग पर आधारित होते हैं। TCID50 परख के मामले में, उद्देश्य विज़ुअलाइज़ेशन आमतौर पर माइक्रोस्कोपी के माध्यम से दृश्य सीपीई का पता लगाने के साथ संयुक्त टिटर्स की गणना करने के लिए इंट्रासेल्युलर वायरस के immunocytochemical (आईसीसी) धुंधला पर आधारित है। हालांकि, आईसीसी धुंधला महंगा और समय लेने वाला है। इस अध्ययन में, हमने माइक्रोस्कोपी, आईसीसी स्टेनिंग और क्रिस्टल वायलेट स्टेनिंग के माध्यम से दृश्य सीपीई अवलोकन की तुलना की ताकि दो सीपीई-बनाने वाले वायरस, इन्फ्लूएंजा ए वायरस (आईएवी) के टिटर्स को निर्धारित किया जा सके सूअर मूल और पोर्सिनी प्रजनन और श्वसन सिंड्रोम वायरस (पीआरआरएसवी)। हम दिखाते हैं कि क्रिस्टल वायलेट और आईसीसी स्टेनिंग दोनों दृश्य सीपीई का पता लगाने की तुलना में अधिक सटीक हैं, जो आईएवी और पीआरआरएसवी दोनों पर परिशुद्धता के लगभग समान स्तर प्रस्तुत करते हैं। इस कारण से, यहां हम क्रिस्टल वायलेट स्टेनिंग को एक तेज़ और अधिक किफायती तरीके के रूप में पेश करते हैं ताकि सीपीई के लिए एक TCID50 परख पर वायरल अनुमापन निर्धारित किया जा सके- सेल लाइनों में titrated वायरस बनाने के लिए।