Cultivo e imágenes de organoides epiteliales nasales humanos

La terapia individualizada para pacientes con fibrosis quística (FQ) se puede lograr con un modelo de enfermedad in vitro para comprender la actividad basal del regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR) y la restauración a partir de compuestos de moléculas pequeñas. Nuestro grupo se centró recientemente en establecer un modelo organoide bien diferenciado derivado directamente de las células epiteliales nasales humanas primarias (HNE). La histología de organoides seccionados, la tinción inmunofluorescente de montaje completo y las imágenes (utilizando microscopía confocal, microscopía inmunofluorescente y campo brillante) son esenciales para caracterizar organoides y confirmar la diferenciación epitelial en preparación para ensayos funcionales. Además, los organoides HNE producen lúmenes de diferentes tamaños que se correlacionan con la actividad de CFTR, distinguiendo entre organoides CF y no CF. En este manuscrito, se describe en detalle la metodología para el cultivo de organoides HNE, centrándose en la evaluación de la diferenciación utilizando las modalidades de imagen, incluida la medición del área de lúmenes basales (un método de medición de la actividad CFTR en organoides que cualquier laboratorio con un microscopio puede emplear), así como el enfoque automatizado desarrollado para un ensayo funcional (que requiere equipos más especializados).