Внутримозговая трансплантация и отслеживание биолюминесценции in vivo нервных клеток-предшественников человека в мозге мыши

Клеточная терапия уже давно является новой парадигмой лечения в экспериментальной нейробиологии. Тем не менее, исследования клеточной трансплантации часто полагаются на измерения конечных точек и, следовательно, могут оценивать только продольные изменения миграции клеток и выживаемости в ограниченной степени. В этой статье представлен надежный, минимально инвазивный протокол для трансплантации и продольного отслеживания нейронных клеток-предшественников (NPC) в мозге взрослой мыши. Перед трансплантацией клетки трансдуцируют лентивирусным вектором, включающим биолюминесцентный (светлячок-люцифераза) и флуоресцентный (зеленый флуоресцентный белок [GFP]) репортер. NPC пересаживаются в правое корковое полушарие с помощью стереотаксических инъекций в сенсомоторную кору. После трансплантации трансплантированные клетки были обнаружены через неповрежденный череп в течение пяти недель (в дни 0, 3, 14, 21, 35) с пределом разрешения 6000 клеток с использованием биолюминесцентной визуализации in vivo . Впоследствии трансплантированные клетки идентифицируются в гистологических срезах мозга и далее характеризуются иммунофлуоресценцией. Таким образом, этот протокол предоставляет ценный инструмент для трансплантации, отслеживания, количественной оценки и характеристики клеток в мозге мыши.