Détection d’épitopes sensibles à la neutralisation dans les antigènes affichés sur les vaccins à base de particules virales (VLP) à l’aide d’un test de capture

Le test de capture de particules de type viral (VLP) est une méthode d’immunoprécipitation, communément appelée « test de traction » utilisée pour purifier et isoler les VLP présentant des antigènes. Les anticorps spécifiques de l’antigène de surface sont couplés et donc immobilisés sur une matrice solide et insoluble telle que des billes. En raison de leur grande affinité avec l’antigène cible, ces anticorps peuvent capturer des VLP décorés de l’antigène apparenté ancré dans l’enveloppe membranaire des VLP. Ce protocole décrit la liaison d’anticorps spécifiques à l’antigène à des billes magnétiques conjuguées à la protéine A ou G. Dans notre étude, les VLP dérivés du virus de l’immunodéficience humaine (VIH) formés par l’antigène spécifique du groupe (Gag) protéine précurseur du noyau viral p55 Gag et affichant les glycoprotéines d’enveloppe (Env) du VIH sont examinés. Les VLP sont capturés à l’aide d’anticorps largement neutralisants (bNAbs) dirigés contre les épitopes sensibles à la neutralisation dans Env. Le test de capture VLP décrit ici représente une méthode sensible et facile à réaliser pour démontrer que (i) les VLP sont décorés avec l’antigène cible respectif, (ii) l’antigène de surface a conservé son intégrité structurelle comme démontré par la liaison spécifique à l’épitope des bNAbs utilisés dans le test et (iii) l’intégrité structurelle des VLP révélée par la détection des protéines Gag dans une analyse par transfert Western ultérieure. Par conséquent, l’utilisation de bNAbs pour l’immunoprécipitation facilite la prédiction de la capacité des vaccins VLP à provoquer une réponse neutralisante des lymphocytes B chez les humains vaccinés. Nous prévoyons que ce protocole fournira à d’autres chercheurs une approche expérimentale précieuse et simple pour examiner les vaccins potentiels à base de VLP.