Rilevamento di epitopi sensibili alla neutralizzazione in antigeni visualizzati su vaccini basati su particelle simili a virus (VLP) utilizzando un test di cattura

Il test di cattura delle particelle simili al virus (VLP) è un metodo di immunoprecipitazione, comunemente noto come "test pull-down" utilizzato per purificare e isolare VLP che mostrano l'antigene. Gli anticorpi antigene-specifici di superficie sono accoppiati e quindi immobilizzati su una matrice solida e insolubile come le perline. A causa della loro elevata affinità con l'antigene bersaglio, questi anticorpi possono catturare VLP decorati con l'antigene affine ancorato nell'involucro di membrana dei VLP. Questo protocollo descrive il legame degli anticorpi antigene-specifici alle perle magnetiche coniugate con proteina A o G. Nel nostro studio, vengono esaminati i VLP derivati dal virus dell'immunodeficienza umana (HIV) formati dalla proteina precursore del nucleo virale dell'antigene specifico del gruppo (Gag) p55 Gag e che mostrano la glicoproteina dell'involucro (Env) dell'HIV. I VLP vengono catturati utilizzando anticorpi ampiamente neutralizzanti (bNAbs) diretti contro epitopi sensibili alla neutralizzazione in Env. Il test di cattura VLP qui delineato rappresenta un metodo sensibile e facile da eseguire per dimostrare che (i) i VLP sono decorati con il rispettivo antigene bersaglio, (ii) l'antigene di superficie ha mantenuto la sua integrità strutturale come dimostrato dal legame epitopo-specifico di bNAbs utilizzato nel test e (iii) l'integrità strutturale dei VLP rivelata dal rilevamento delle proteine Gag in una successiva analisi Western blot. Di conseguenza, l'utilizzo di bNAbs per l'immunoprecipitazione facilita una previsione se i vaccini VLP saranno in grado di suscitare una risposta neutralizzante delle cellule B negli esseri umani vaccinati. Prevediamo che questo protocollo fornirà ad altri ricercatori un approccio sperimentale prezioso e diretto per esaminare potenziali vaccini basati su VLP.