Virüs Benzeri Parçacık (VLP) Tabanlı Aşılarda Bir Yakalama Tahlili Kullanılarak Görüntülenen Antijenlerde Nötralizasyona Duyarlı Epitopların Tespiti

Virüs benzeri parçacık (VLP) yakalama testi, antijen gösteren VLP'leri arındırmak ve izole etmek için kullanılan ve yaygın olarak 'aşağı çekme testi' olarak bilinen bir immün önkalım yöntemidir. Yüzey antijenine özgü antikorlar bir araya getirilir ve böylece boncuklar gibi katı ve çözünmez bir matris üzerinde hareketsiz hale getirilir. Hedef antijene yüksek yakınlıkları nedeniyle, bu antikorlar VLP'lerin membran zarfında tutturulmuş konyak antijeni ile süslenmiş VLP'leri yakalayabilir. Bu protokol, antijene özgü antikorların protein A veya G-konjuge manyetik boncuklara bağlanmasını açıklar. Çalışmamızda, gruba özgü antijen (Gag) viral çekirdek öncül protein p55 Gag tarafından oluşturulan ve HIV'in zarf glikoproteinlerinin (Env) görüntülenmesi ile oluşturulan insan immün yetmezlik virüsü (HIV) türevi VLP'ler incelenmiştir. VLP'ler, Env'deki nötralizasyona duyarlı epitoplara karşı yönlendirilen geniş nötralize edici antikorlar (bNAbs) kullanılarak yakalanır. Burada özetlenen VLP yakalama tahlili, (i) VLP'lerin ilgili hedef antijenle süslendiğini, (ii) yüzey antijeninin testte kullanılan bNAb'lerin epitopa özgü bağlanmasında ve (iii) gag proteinlerinin sonraki bir Batı blot analizinde tespit edilmesiyle ortaya çıkan VLP'lerin yapısal bütünlüğünün gösterildiği gibi yapısal bütünlüğünü koruduğunu gösteren hassas ve gerçekleştirilmesi kolay bir yöntemi temsil eder. Sonuç olarak, bNAbs'in immün önksepitasyon için kullanılması, VLP aşılarının aşılanmış insanlarda nötralize edici bir B hücresi yanıtı ortaya çıkarıp çıkaramayacağına dair bir tahminde bulunur. Bu protokolün diğer araştırmacılara potansiyel VLP tabanlı aşıları incelemek için değerli ve basit bir deneysel yaklaşım sağlayacağı öngörüldür.