Focalización de la placa neural murina mediante nanoinyección in utero (NEPTUNE) en el día embrionario 7.5

La manipulación de la expresión génica en el cerebro del ratón en desarrollo en el útero tiene un gran potencial para los estudios de genética funcional. Sin embargo, anteriormente se ha restringido en gran medida a la manipulación de etapas embrionarias posteriores a la neurulación. Se desarrolló un protocolo para inyectar la cavidad amniótica en el día embrionario (E)7.5 y administrar lentivirus, codificando cDNA o shRNA, apuntando al >95% de las células de la placa neural y la cresta neural, contribuyendo al futuro cerebro, médula espinal y sistema nervioso periférico. Este protocolo describe los pasos necesarios para lograr una transducción exitosa, incluida la molienda de las agujas capilares de vidrio, la verificación del embarazo, la estadificación del desarrollo mediante imágenes de ultrasonido y los volúmenes de inyección óptimos adaptados a las etapas embrionarias.

Siguiendo este protocolo, es posible lograr la transducción del >95% del cerebro en desarrollo con lentivirus de alto título y, por lo tanto, realizar la manipulación genética de todo el cerebro. En contraste, es posible lograr la transducción en mosaico utilizando títulos virales más bajos, lo que permite la detección genética o el rastreo del linaje. La inyección en E7.5 también se dirige al ectodermo y la cresta neural que contribuyen a distintos compartimentos del ojo, la lengua y el sistema nervioso periférico. Por lo tanto, esta técnica ofrece la posibilidad de manipular la expresión génica en tejidos derivados de la placa neuronal y el ectodermo de ratón desde las etapas de preneurulación, con el beneficio de reducir el número de ratones utilizados en experimentos.