Murine neurale plade målretning af In Utero nano-injektion (NEPTUN) på embryonal dag 7.5

Manipulation af genekspression i den udviklende musehjerne i utero har et stort potentiale for funktionelle genetikstudier. Det har dog tidligere stort set været begrænset til manipulation af embryonale stadier efter neurulation. En protokol blev udviklet til at injicere fosterhulen ved embryonal dag (E) 7.5 og levere lentivirus, kodning af cDNA eller shRNA, rettet mod >95% af neurale plade- og neurale kamceller, hvilket bidrager til den fremtidige hjerne, rygmarv og perifere nervesystem. Denne protokol beskriver de trin, der er nødvendige for at opnå en vellykket transduktion, herunder slibning af glaskapillærnåle, graviditetsverifikation, udviklingsmæssig iscenesættelse ved hjælp af ultralydsbilleddannelse og optimale injektionsvolumener matchet med embryonale stadier.

Efter denne protokol er det muligt at opnå transduktion af >95% af den udviklende hjerne med højtiter lentivirus og dermed udføre genmanipulation i hele hjernen. I modsætning hertil er det muligt at opnå mosaiktransduktion ved hjælp af lavere virale titere, hvilket giver mulighed for genetisk screening eller afstamningssporing. Injektion ved E7.5 er også rettet mod ektoderm og neural crest, der bidrager til forskellige rum i øjet, tungen og det perifere nervesystem. Denne teknik giver således mulighed for at manipulere genekspression i mus neurale plade- og ektodermafledte væv fra præneurulationsstadier med den fordel at reducere antallet af mus, der anvendes i forsøg.