En kontrast mellem tre podningsteknikker, der bruges til at bestemme løbet af ukendt Fusarium oxysporum f.sp. niveum Isolater

Summary

Håndtering af Fusarium vilje af vandmelon kræver viden om de tilstedeværende patogenløb. Her beskriver vi roddyp, inficeret kernesåning og modificerede tray-dip-podningsmetoder for at demonstrere deres effektivitet ved race-typning af den patogene svamp Fusarium oxysporum f. sp niveum (Fon).

Abstract

Fusarium vilje af vandmelon (Citrullus lanatus), forårsaget af Fusarium oxysporum f. sp. niveum (Fon), er genopstået som en stor produktionsbegrænsning i det sydøstlige USA, især i Florida. Indførelse af integrerede skadedyrsbekæmpelsesstrategier, såsom racespecifikke resistente sorter, kræver oplysninger om patogenets mangfoldighed og befolkningstæthed på avlernes marker. På trods af visse fremskridt med at udvikle molekylære diagnostiske værktøjer til identifikation af patogenisolater kræver racebestemmelse ofte bioassay-tilgange.

Race typing blev udført ved rod-dip podning, inficeret kerne såning metode, og den modificerede bakke-dip metode med hver af de fire vandmelon forskelle (Black Diamond, Charleston Grey, Calhoun Grey, Plant Introduction 296341-FR). Isolater tildeles en racebetegnelse ved beregning af sygdomsforekomst fem uger efter podning. Hvis mindre end 33% af planterne for en bestemt sort var symptomatiske, blev de kategoriseret som resistente. De sorter med en forekomst på over 33 % blev betragtet som modtagelige. Dette papir beskriver tre forskellige metoder til podning for at fastslå race, roddip, inficeret kerne og modificeret bakke-dip-podning, hvis anvendelser varierer alt efter det eksperimentelle design.

Introduction

De jordbårne svampe, der udgør Fusarium oxysporum artskomplekset (FOSC), er virkningsfulde hemibiotrofe plantepatogener, der kan forårsage alvorlig sygdom og udbyttetab i en bred vifte af afgrøder¹. Fusarium vilje af vandmelon, forårsaget af F. oxysporum f. sp. niveum (Fon), har været stigende i omfang, forekomst og sværhedsgrad over hele verden i de sidste årtier ^2,3. I frøplanter ligner symptomerne på Fusarium-vilje ofte dæmpning. I ældre planter bliver løvet gråt, klorotisk og nekrotisk. Til sidst udvikler planternes visning sig til fuld plantekoll....

Protocol

1. Bestemmelse af race ved hjælp af roddypmetode (RDM)

1. Forberedelse af forsøgsmiljøet
   1. Fordi symptomekspression er meget afhængig af miljøforholdene, skal du opretholde planter i et kontrolleret område. Overvåg relativ luftfugtighed, temperatur, fotoopår og lysintensitet (figur 1).
      1. Indstil temperaturen til 26-28 °C, relativ luftfugtighed til 50-75 %, og indstil en fotoperiode på 16 timer for at sikre tilstrækkelig plantevækst og sundhed.<.......

Discussion

Tre metoder til race typing er blevet præsenteret. Hver af disse metoder er bedst egnet til bestemte spørgsmål og eksperimentelle forhold. Den angrebne kernepodningsmetode (jordangreb) er måske enklere og mere ligetil, hvilket gør den særlig nyttig til vurdering af patogenicitet³⁰. Brug af denne metode til simpel race-typing er yderst effektiv. Det kan imidlertid være en udfordring at anvende metoden til at bestemme resistensen af en bestemt sort, da hver plante muligvis ikke står over for.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
100% Fuller’s Earth	Sigma-Aldrich	F200-5KG
1 L glass Erlenmeyer Flask	PYREX	4980-1L
15 mL falcon tubes	Fisher Scientific	14-959-49B
50 mL graduated cylinder	Lab Safety Supply	41121805
50 mL Eppendorf Conical Tubes	Fisher Scientific	05-413-921
Aluminum foil wrap	Reynolds Wrap	720
Bleach	Walmart	587192290
Bunsen burner	Fisher Scientific	03-391-301
CaCO3	sigma-Aldrich	239216
cell spreaders	Fisher Scientific	08-100-11
Cheesecloth	Lions Services, Inc	8305-01-125-0725
Clear plastic dishes	Visions Wave	999RP6CLSS	~15 cm diameter
Clear vinyl tubing for mushroom bag clamps	Shroom Supply		6" for small bag, 8" for medium bag, 10" for large bag
Cotton Balls	Fisherbrand	22-456-885	Sterile
Ethanol	Fisher Chemical	A4094	100%, then combine with water to make 70% for use
Flourescent Tube Lights	MaxLume	Model T5	2800 K Color Temperature, 24'' or 48'' long
granulated agar	VWR International	90000-786
Hand-held Spray Bottle	Ability One	24122002	~0.95 L
hemacytometer	Fisher Scientific	02-671-55A	Two chamber hemacytometer
Lab trays	Fisher Scientific	15-236-2A
Large, sealable plastic bags	Ziploc	430805	38 cm x 38 cm
Mister / watering can	Bar5F	B10H22
Mushroom Bag Clamp	Shroom Supply		6" for small bag, 8" for medium bag, 10" for large bag
Nitrile Gloves	Fisher Scientific	19-130-1597D
Organic Rye Berries	Shroom Supply		0.5 gallon or 25 lb bags
P1000 pipette and tips	Fisher Scientific	14-388-100
Petri dishes	Fisherbrand	FB0875713	Round, 100 mm diameter, 15 mm height
Planting media	Jolly Gardener	Pro-Line C/B
Plastic Pitcher	BrandTech	UX0600850	1 L or larger
Plastic planting pots	Neo/SCI	01-1177	~15 cm diameter and ~10 cm height
Plastic, autoclave-safe bin	Thermo Scientific	UX0601022	3 L
Quarter-strength potato dextrose agar media	Cole-Parmer	UX1420028	Use powder in combination with recipe for QPDA
Scientific Balance Scale, measuring in g	Ohaus	30208458	Any precise scale that can hold and measure 200g will work
Size #4 cork bore	Cole-Parmer	NC9585352
Small Mushroom grow bag	Shroom Supply		0.5 micron filter, also comes in medium and large sizes
Soil trowel	Walmart	563876946
Styrofoam flats (6 x 12 cells)	Speedling	Model TR72A
Styrofoam flats (8 x 16 cells)	Speedling	Model TR128A
Syringe (5 or 10 mL)	fisher Scientific	14-829-19C
Timer	Walmart	TM-01
V8 Original 100% Vegetable Juice	Walmart	564638212
vortex	Fisher Scientific	02-215-418
Watermelon Seed - Black Diamond	Willhite Seed Inc	17
Watermelon Seed - Calhoun Gray	Holmes Seed Company	4440
Watermelon Seed - Charleston Gray	Bonnie Plants	7.15339E+11
Watermelon Seed - PI 296341-FR	Contact authors	Contact authors
Wheat Kernels (Maxie var.) (optional)	Alachua County Feed & Seed