Un contraste de trois techniques d’inoculation utilisées pour déterminer la race de Fusarium oxysporum f.sp. inconnu niveum Isolats

Summary

La gestion de la flétrissure fusarium de la pastèque nécessite la connaissance des races pathogènes présentes. Ici, nous décrivons les méthodes d’inoculation par trempage des racines, d’ensemencement infesté des grains et de barquette modifiée pour démontrer leur efficacité dans le typage racinaire du champignon pathogène Fusarium oxysporum f. sp niveum (Fon).

Abstract

La flétrissure de fusarium de la pastèque (Citrullus lanatus), causée par Fusarium oxysporum f. sp. niveum (Fon), est réapparue comme une contrainte de production majeure dans le sud-est des États-Unis, en particulier en Floride. Le déploiement de stratégies intégrées de lutte antiparasitaire, comme les cultivars résistants spécifiques à la race, nécessite des informations sur la diversité et la densité de population de l’agent pathogène dans les champs des producteurs. Malgré certains progrès dans le développement d’outils de diagnostic moléculaire pour identifier les isolats d’agents pathogènes, la détermination de la race nécessite souvent des approches de bioessai.

Le typage de race a été effectué par inoculation par trempage racinaire, méthode d’ensemencement du noyau infesté et méthode modifiée de barquette avec chacun des quatre différentiels de pastèque (Black Diamond, Charleston Grey, Calhoun Grey, Plant Introduction 296341-FR). Les isolats se voient attribuer une désignation de race par calcul de l’incidence de la maladie cinq semaines après l’inoculation. Si moins de 33 % des plantes d’un cultivar particulier étaient symptomatiques, elles étaient classées comme résistantes. Les cultivars dont l’incidence était supérieure à 33 % étaient considérés comme sensibles. Cet article décrit trois méthodes différentes d’inoculation pour déterminer la race, le trempage racinaire, le noyau infesté et l’inoculation modifiée par bac, dont les applications varient selon la conception expérimentale.

Introduction

Les champignons du sol qui composent le complexe d’espèces Fusarium oxysporum (FOSC) sont des agents pathogènes hémibiotrophes des plantes qui peuvent causer de graves maladies et une perte de rendement dans une gamme variée de cultures¹. La flétrissure fusarium de la pastèque, causée par F. oxysporum f. sp. niveum (Fon), a augmenté en portée, en incidence et en gravité dans le monde entier au cours des dernières décennies ^2,3. Chez les semis, les symptômes du flétrissement de Fusarium ressemblent souvent à un amortissement. Chez les plantes plus âgée....

Protocol

1. Détermination de la race par la méthode root-dip (RDM)

1. Préparation de l’environnement expérimental
   1. Parce que l’expression des symptômes dépend fortement des conditions environnementales, maintenez les plantes dans une zone contrôlée. Surveillez l’humidité relative, la température, la photopériode et l’intensité lumineuse (Figure 1).
      1. Réglez la température à 26-28 °C, l’humidité relative à 50-75% et réglez une photopér.......

Discussion

Trois méthodes de typage de race ont été présentées. Chacune de ces méthodes est la mieux adaptée à des questions et des conditions expérimentales particulières. La méthode d’inoculation du noyau infesté (infestation du sol) est peut-être plus simple et plus directe, ce qui la rend particulièrement utile pour l’évaluation de la pathogénicité³⁰. L’utilisation de cette méthode pour un typage de course simple est très efficace. Cependant, l’application de la méthode pour d.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
100% Fuller’s Earth	Sigma-Aldrich	F200-5KG
1 L glass Erlenmeyer Flask	PYREX	4980-1L
15 mL falcon tubes	Fisher Scientific	14-959-49B
50 mL graduated cylinder	Lab Safety Supply	41121805
50 mL Eppendorf Conical Tubes	Fisher Scientific	05-413-921
Aluminum foil wrap	Reynolds Wrap	720
Bleach	Walmart	587192290
Bunsen burner	Fisher Scientific	03-391-301
CaCO3	sigma-Aldrich	239216
cell spreaders	Fisher Scientific	08-100-11
Cheesecloth	Lions Services, Inc	8305-01-125-0725
Clear plastic dishes	Visions Wave	999RP6CLSS	~15 cm diameter
Clear vinyl tubing for mushroom bag clamps	Shroom Supply		6" for small bag, 8" for medium bag, 10" for large bag
Cotton Balls	Fisherbrand	22-456-885	Sterile
Ethanol	Fisher Chemical	A4094	100%, then combine with water to make 70% for use
Flourescent Tube Lights	MaxLume	Model T5	2800 K Color Temperature, 24'' or 48'' long
granulated agar	VWR International	90000-786
Hand-held Spray Bottle	Ability One	24122002	~0.95 L
hemacytometer	Fisher Scientific	02-671-55A	Two chamber hemacytometer
Lab trays	Fisher Scientific	15-236-2A
Large, sealable plastic bags	Ziploc	430805	38 cm x 38 cm
Mister / watering can	Bar5F	B10H22
Mushroom Bag Clamp	Shroom Supply		6" for small bag, 8" for medium bag, 10" for large bag
Nitrile Gloves	Fisher Scientific	19-130-1597D
Organic Rye Berries	Shroom Supply		0.5 gallon or 25 lb bags
P1000 pipette and tips	Fisher Scientific	14-388-100
Petri dishes	Fisherbrand	FB0875713	Round, 100 mm diameter, 15 mm height
Planting media	Jolly Gardener	Pro-Line C/B
Plastic Pitcher	BrandTech	UX0600850	1 L or larger
Plastic planting pots	Neo/SCI	01-1177	~15 cm diameter and ~10 cm height
Plastic, autoclave-safe bin	Thermo Scientific	UX0601022	3 L
Quarter-strength potato dextrose agar media	Cole-Parmer	UX1420028	Use powder in combination with recipe for QPDA
Scientific Balance Scale, measuring in g	Ohaus	30208458	Any precise scale that can hold and measure 200g will work
Size #4 cork bore	Cole-Parmer	NC9585352
Small Mushroom grow bag	Shroom Supply		0.5 micron filter, also comes in medium and large sizes
Soil trowel	Walmart	563876946
Styrofoam flats (6 x 12 cells)	Speedling	Model TR72A
Styrofoam flats (8 x 16 cells)	Speedling	Model TR128A
Syringe (5 or 10 mL)	fisher Scientific	14-829-19C
Timer	Walmart	TM-01
V8 Original 100% Vegetable Juice	Walmart	564638212
vortex	Fisher Scientific	02-215-418
Watermelon Seed - Black Diamond	Willhite Seed Inc	17
Watermelon Seed - Calhoun Gray	Holmes Seed Company	4440
Watermelon Seed - Charleston Gray	Bonnie Plants	7.15339E+11
Watermelon Seed - PI 296341-FR	Contact authors	Contact authors
Wheat Kernels (Maxie var.) (optional)	Alachua County Feed & Seed