Ein Kontrast von drei Impftechniken, die verwendet werden, um die Rasse von unbekanntem Fusarium oxysporum f.sp. Niveum Isoliert

Summary

Die Behandlung der Fusariumwelke der Wassermelone erfordert die Kenntnis der vorhandenen Erregerrassen. Hier beschreiben wir die Root-Dip-, befallenen Kernaussaat- und modifizierten Tray-Dip-Impfmethoden, um ihre Wirksamkeit bei der Rassentypisierung des pathogenen Pilzes Fusarium oxysporum f. sp niveum (Fon) nachzuweisen.

Abstract

Die Fusariumwelke der Wassermelone (Citrullus lanatus), verursacht durch Fusarium oxysporum f. sp. niveum (Fon), ist im Südosten der USA, insbesondere in Florida, wieder zu einem wichtigen Produktionsdruck geworden. Der Einsatz integrierter Schädlingsbekämpfungsstrategien, wie z. B. rassenspezifische resistente Sorten, erfordert Informationen über die Vielfalt und Populationsdichte des Erregers auf den Feldern der Erzeuger. Trotz einiger Fortschritte bei der Entwicklung molekulardiagnostischer Instrumente zur Identifizierung von Pathogenisolaten erfordert die Rassenbestimmung häufig Bioassay-Ansätze.

Die Rassentypisierung wurde durch Wurzel-Dip-Impfung, befallene Kernaussaatmethode und die modifizierte Tray-Dip-Methode mit jedem der vier Wassermelonendifferentiale (Black Diamond, Charleston Grey, Calhoun Grey, Plant Introduction 296341-FR) durchgeführt. Isolate erhalten durch Berechnung der Krankheitsinzidenz fünf Wochen nach der Impfung eine Rassenbezeichnung. Wenn weniger als 33% der Pflanzen für eine bestimmte Sorte symptomatisch waren, wurden sie als resistent eingestuft. Diejenigen Sorten mit einer Inzidenz von mehr als 33% wurden als anfällig angesehen. Dieses Papier beschreibt drei verschiedene Methoden der Impfung zur Bestimmung von Rasse, Wurzel-Dip, befallenem Kern und modifizierter Tray-Dip-Impfung, deren Anwendungen je nach experimentellem Design variieren.

Introduction

Die bodenbürtigen Pilze, aus denen der Fusarium oxysporum species complex (FOSC) besteht, sind wirkungsvolle hemibiotrophe Pflanzenpathogene, die bei einer Vielzahl von Kulturen schwere Krankheiten und Ertragsverluste verursachen können¹. Die durch F. oxysporum f. sp. niveum (Fon) verursachte Fusariumwelke der Wassermelone hat in den letzten Jahrzehnten weltweit an Umfang, Häufigkeit und Schweregrad zugenommen ^2,3. Bei Sämlingen ähneln die Symptome der Fusariumwelke oft einer Dämpfung. Bei älteren Pflanzen wird das Laub grau, chlorotisch und nekrotis....

Protocol

1. Bestimmung der Rasse durch Root-Dip-Methode (RDM)

1. Vorbereitung der Versuchsumgebung
   1. Da die Symptomexpression stark von den Umweltbedingungen abhängt, halten Sie Pflanzen in einem kontrollierten Bereich. Überwachen Sie die relative Luftfeuchtigkeit, Temperatur, Photoperiode und Lichtintensität (Abbildung 1).
      1. Stellen Sie die Temperatur auf 26-28 ° C, die relative Luftfeuchtigkeit auf 50-75% ein und stellen Sie eine Photoperiode von 16 Stunden e.......

Discussion

Drei Methoden der Rassentypisierung wurden vorgestellt. Jede dieser Methoden eignet sich am besten für bestimmte Fragestellungen und experimentelle Bedingungen. Die befallene Kernimpfmethode (Bodenbefall) ist vielleicht einfacher und unkomplizierter, was sie besonders nützlich für die Beurteilung der Pathogenität^{macht 30}. Die Verwendung dieser Methode für einfaches Renntypisieren ist sehr effektiv. Die Anwendung der Methode zur Bestimmung der Resistenz einer bestimmten Sorte könnte jedoch ei.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
100% Fuller’s Earth	Sigma-Aldrich	F200-5KG
1 L glass Erlenmeyer Flask	PYREX	4980-1L
15 mL falcon tubes	Fisher Scientific	14-959-49B
50 mL graduated cylinder	Lab Safety Supply	41121805
50 mL Eppendorf Conical Tubes	Fisher Scientific	05-413-921
Aluminum foil wrap	Reynolds Wrap	720
Bleach	Walmart	587192290
Bunsen burner	Fisher Scientific	03-391-301
CaCO3	sigma-Aldrich	239216
cell spreaders	Fisher Scientific	08-100-11
Cheesecloth	Lions Services, Inc	8305-01-125-0725
Clear plastic dishes	Visions Wave	999RP6CLSS	~15 cm diameter
Clear vinyl tubing for mushroom bag clamps	Shroom Supply		6" for small bag, 8" for medium bag, 10" for large bag
Cotton Balls	Fisherbrand	22-456-885	Sterile
Ethanol	Fisher Chemical	A4094	100%, then combine with water to make 70% for use
Flourescent Tube Lights	MaxLume	Model T5	2800 K Color Temperature, 24'' or 48'' long
granulated agar	VWR International	90000-786
Hand-held Spray Bottle	Ability One	24122002	~0.95 L
hemacytometer	Fisher Scientific	02-671-55A	Two chamber hemacytometer
Lab trays	Fisher Scientific	15-236-2A
Large, sealable plastic bags	Ziploc	430805	38 cm x 38 cm
Mister / watering can	Bar5F	B10H22
Mushroom Bag Clamp	Shroom Supply		6" for small bag, 8" for medium bag, 10" for large bag
Nitrile Gloves	Fisher Scientific	19-130-1597D
Organic Rye Berries	Shroom Supply		0.5 gallon or 25 lb bags
P1000 pipette and tips	Fisher Scientific	14-388-100
Petri dishes	Fisherbrand	FB0875713	Round, 100 mm diameter, 15 mm height
Planting media	Jolly Gardener	Pro-Line C/B
Plastic Pitcher	BrandTech	UX0600850	1 L or larger
Plastic planting pots	Neo/SCI	01-1177	~15 cm diameter and ~10 cm height
Plastic, autoclave-safe bin	Thermo Scientific	UX0601022	3 L
Quarter-strength potato dextrose agar media	Cole-Parmer	UX1420028	Use powder in combination with recipe for QPDA
Scientific Balance Scale, measuring in g	Ohaus	30208458	Any precise scale that can hold and measure 200g will work
Size #4 cork bore	Cole-Parmer	NC9585352
Small Mushroom grow bag	Shroom Supply		0.5 micron filter, also comes in medium and large sizes
Soil trowel	Walmart	563876946
Styrofoam flats (6 x 12 cells)	Speedling	Model TR72A
Styrofoam flats (8 x 16 cells)	Speedling	Model TR128A
Syringe (5 or 10 mL)	fisher Scientific	14-829-19C
Timer	Walmart	TM-01
V8 Original 100% Vegetable Juice	Walmart	564638212
vortex	Fisher Scientific	02-215-418
Watermelon Seed - Black Diamond	Willhite Seed Inc	17
Watermelon Seed - Calhoun Gray	Holmes Seed Company	4440
Watermelon Seed - Charleston Gray	Bonnie Plants	7.15339E+11
Watermelon Seed - PI 296341-FR	Contact authors	Contact authors
Wheat Kernels (Maxie var.) (optional)	Alachua County Feed & Seed