未知の フザリウム・オキシスポラム f.spの人種を決定するために使用された3つの接種技術の対照。 ニベウム 分離

要約

スイカのフザリウムのしおれを管理するには、存在する病原体種族の知識が必要です。ここでは、病原性真菌 Fusarium oxysporum f. sp niveum (Fon)のレースタイピングにおけるそれらの有効性を実証するために、根浸漬、寄生カーネル播種、および改変トレイディップ接種法について説明する。

要約

フザリウム・オキシスポラム・f・sp・ニベウム(Fon)によって引き起こされるスイカ(Citrullus lanatus)のフザリウム萎凋病は、米国南東部、特にフロリダ州で主要な生産制約として再浮上している。人種特異的な耐性品種などの統合害虫管理戦略を展開するには、栽培者の畑における病原体の多様性と個体群密度に関する情報が必要です。病原体分離株を同定するための分子診断ツールの開発にはいくらかの進歩があるものの、人種決定にはしばしばバイオアッセイアプローチが必要である。

レースタイピングは、4つのスイカディファレンシャル(ブラックダイヤモンド、チャールストングレー、カルフーングレー、植物紹介296341-FR)のそれぞれを用いて、ルートディップ接種、寄生カーネル播種法、および改変トレイディップ法によって実施した。分離株は、接種後5週間で疾患発生率の計算によって人種指定が割り当てられる。特定の品種の植物の33%未満が症候性であった場合、それらは耐性として分類された。発生率が33%を超える品種は感受性とみなされた。本稿では、種族、根浸漬、寄生核、および改変トレイディップ接種を確かめるための3つの異なる接種方法について説明するが、その接種方法は実験計画によって異なる。

概要

フザリウム・オキシスポラム種複合体(FOSC)を構成する土壌媒介性真菌は、多様な作物において重篤な病害および収量損失を引き起こす可能性のある、影響力のある半生物栄養性植物病原体である¹。F. oxysporum f. sp. niveum(Fon)によって引き起こされるスイカのフザリウム萎凋病は、過去数十年で世界中で範囲、発生率、および重症度が増加しています^2,3。苗木では、フザリウムの萎凋病の症状はしばしば減衰に似ています。古い植物では、葉は灰色、クロロチック、および壊死性になります。最終的に、植物のしおれは完全な植物崩壊および死に進行する⁴。直接的な収量損失は、症状および植物死のために起こり得、一方、間接的な収量損失は、葉面キャノ^ピー5の除去によって引き起こされる太陽の損傷のために起こり得る。有性生殖および関連する生殖構造は、F. oxysporumにおいて観察されたことがない。しかし、病原体は、マイクロコニジアとマクロコニジアの2種類の無性胞子と、クラミドス胞子と呼ばれるより大きく長期的な生存構造を産生し、土壌中で長年生存することができます^6....

プロトコル

1. ルートディップ法(RDM)による人種の決定

1. 実験環境の整備
   1. 症状発現は環境条件に大きく依存するため、管理区域で植物を維持する。相対湿度、温度、光周期、および光強度を監視します(図1)。
      1. 温度を26〜28°C、相対湿度を50〜75%に設定し、16時間の光周期を設定して、植物の成長と健康を確保します。
         注:低酸素症、苗のしおれ、および/または種子の腐敗を防ぐために、苗の周りに水をやり過ぎたり、水を放置したりしないでください。
      2. 光合成の成長をサポートするために、少なくとも1850ルーメンの光と2,800 Kの色温度を持つ2つの蛍光管ライトを使用してください。
      3. 地域を清潔に保ち、害虫の被害や偶発的な感染を防ぐために、廃土や植物の破片の除去などの衛生的な慣行を使用してください。
   2. 植え付け条件
      1. 8 x 16セル(幅25 cm x 長さ50 cm)のスタートフラットに植栽用培地を充填し、タップダウンして土壌をわずかに圧縮します(図2)。
      2. ブラックダイヤモンド/シュガーベイビー、チャールストングレイ/オールスイート/ディキシーリー、カルフーングレイ、PI-296341-FRの4つの異なる品種の種子....

結果

これらの実験は、一般的に栽培されている品種の相対的な耐性を定義するのに役立ちます(表1)。この情報は、地元のフォン個体数に基づいて管理上の推奨事項を導くために使用できます。言い換えれば、人種0または1が商業分野に存在することが知られている場合、農家はカルフーングレイ、サンシュガー、または同等の「耐性」品種を栽培する傾向があるかもしれません。すべ.......

ディスカッション

レースタイピングの3つの方法が提示されている。これらの方法のそれぞれは、特定の質問および実験条件に最も適している。寄生カーネル接種法(土壌侵入)は、おそらくより単純でより単純であり、病原性の評価に特に有用である³⁰。この方法を単純なレースタイピングに使用すると、非常に効果的です。しかし、各植物が同じ程度の感染または曝露に直面しない可能性が?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
100% Fuller’s Earth	Sigma-Aldrich	F200-5KG
1 L glass Erlenmeyer Flask	PYREX	4980-1L
15 mL falcon tubes	Fisher Scientific	14-959-49B
50 mL graduated cylinder	Lab Safety Supply	41121805
50 mL Eppendorf Conical Tubes	Fisher Scientific	05-413-921
Aluminum foil wrap	Reynolds Wrap	720
Bleach	Walmart	587192290
Bunsen burner	Fisher Scientific	03-391-301
CaCO3	sigma-Aldrich	239216
cell spreaders	Fisher Scientific	08-100-11
Cheesecloth	Lions Services, Inc	8305-01-125-0725
Clear plastic dishes	Visions Wave	999RP6CLSS	~15 cm diameter
Clear vinyl tubing for mushroom bag clamps	Shroom Supply		6" for small bag, 8" for medium bag, 10" for large bag
Cotton Balls	Fisherbrand	22-456-885	Sterile
Ethanol	Fisher Chemical	A4094	100%, then combine with water to make 70% for use
Flourescent Tube Lights	MaxLume	Model T5	2800 K Color Temperature, 24'' or 48'' long
granulated agar	VWR International	90000-786
Hand-held Spray Bottle	Ability One	24122002	~0.95 L
hemacytometer	Fisher Scientific	02-671-55A	Two chamber hemacytometer
Lab trays	Fisher Scientific	15-236-2A
Large, sealable plastic bags	Ziploc	430805	38 cm x 38 cm
Mister / watering can	Bar5F	B10H22
Mushroom Bag Clamp	Shroom Supply		6" for small bag, 8" for medium bag, 10" for large bag
Nitrile Gloves	Fisher Scientific	19-130-1597D
Organic Rye Berries	Shroom Supply		0.5 gallon or 25 lb bags
P1000 pipette and tips	Fisher Scientific	14-388-100
Petri dishes	Fisherbrand	FB0875713	Round, 100 mm diameter, 15 mm height
Planting media	Jolly Gardener	Pro-Line C/B
Plastic Pitcher	BrandTech	UX0600850	1 L or larger
Plastic planting pots	Neo/SCI	01-1177	~15 cm diameter and ~10 cm height
Plastic, autoclave-safe bin	Thermo Scientific	UX0601022	3 L
Quarter-strength potato dextrose agar media	Cole-Parmer	UX1420028	Use powder in combination with recipe for QPDA
Scientific Balance Scale, measuring in g	Ohaus	30208458	Any precise scale that can hold and measure 200g will work
Size #4 cork bore	Cole-Parmer	NC9585352
Small Mushroom grow bag	Shroom Supply		0.5 micron filter, also comes in medium and large sizes
Soil trowel	Walmart	563876946
Styrofoam flats (6 x 12 cells)	Speedling	Model TR72A
Styrofoam flats (8 x 16 cells)	Speedling	Model TR128A
Syringe (5 or 10 mL)	fisher Scientific	14-829-19C
Timer	Walmart	TM-01
V8 Original 100% Vegetable Juice	Walmart	564638212
vortex	Fisher Scientific	02-215-418
Watermelon Seed - Black Diamond	Willhite Seed Inc	17
Watermelon Seed - Calhoun Gray	Holmes Seed Company	4440
Watermelon Seed - Charleston Gray	Bonnie Plants	7.15339E+11
Watermelon Seed - PI 296341-FR	Contact authors	Contact authors
Wheat Kernels (Maxie var.) (optional)	Alachua County Feed & Seed