알려지지 않은 Fusarium oxysporum f.sp.의 인종을 결정하는 데 사용되는 세 가지 접종 기술의 대조. 니벳 격리

Summary

수박의 Fusarium wilt를 관리하려면 존재하는 병원균 종족에 대한 지식이 필요합니다. 여기에서, 우리는 병원성 균류 Fusarium oxysporum f. sp niveum (Fon)의 인종 타이핑에서 그들의 효능을 입증하기 위해 뿌리 딥, 감염된 커널 시딩, 및 변형된 트레이-딥 접종 방법을 설명한다.

Abstract

Fusarium oxysporum f. sp. niveum (Fon)에 의해 유발 된 수박의 Fusarium wilt (Citrullus lanatus)는 미국 남동부, 특히 플로리다에서 주요 생산 제약으로 다시 부상했습니다. 인종별 내성 품종과 같은 통합 해충 관리 전략을 수립하려면 재배자의 분야에서 병원균의 다양성과 인구 밀도에 대한 정보가 필요합니다. 병원체 분리물을 확인하기 위한 분자 진단 도구 개발의 일부 진전에도 불구하고, 인종 결정은 종종 생물분석 접근법을 필요로 한다.

레이스 타이핑은 뿌리딥 접종, 감염된 커널 시딩 방법, 및 네 개의 수박 차동 각각을 사용한 변형된 트레이-딥 방법(블랙 다이아몬드, 찰스턴 그레이, 칼훈 그레이, 식물 소개 296341-FR)에 의해 수행되었다. 격리는 접종 후 다섯 주 후에 질병 발생률의 계산에 의해 인종 지정을 할당됩니다. 특정 재배자에 대한 식물의 33 % 미만이 증상이 있으면 내성으로 분류되었습니다. 발병률이 33 % 이상인 품종은 감수성이있는 것으로 간주되었습니다. 이 논문은 인종, 뿌리 딥, 감염된 커널 및 변형 된 트레이 딥 접종을 확인하기위한 세 가지 접종 방법을 설명하며, 실험 설계에 따라 응용 프로그램이 다릅니다.

Introduction

Fusarium oxysporum 종 복합체 (FOSC)를 구성하는 토양 매개 곰팡이는 다양한 범위의 작물에서 심각한 질병과 수확량 손실을 일으킬 수있는 영향력있는 반생물 영양 식물 병원균입니다¹. F. oxysporum f. sp. niveum (Fon)에 의해 야기 된 수박의 Fusarium wilt는 지난 수십 년 동안 전 세계적으로 범위, 발생률 및 심각도가 증가하고 있습니다 ^2,3. 묘목에서 Fusarium wilt의 증상은 종종 댐핑 오프와 유사합니다. 오래된 식물에서는 단풍이 회색, 엽록색 및 괴사가됩니다. 결국, 식물의 시들음은 완전한 식물 붕괴와 죽음으로 진행된다⁴. 직접적인 수확량 손실은 증상 및 식물 사멸로 인해 발생하는 반면, 간접 수확량 손실은 엽면 캐노피의 제거로 인한 태양 손상으로 인해 발생할 수 있습니다⁵. 성적 재생산 및 관련 생식 구조는 F. oxysporum 에서 관찰 된 적이 없습니다. 그러나 병원균은 두 가지 유형의 무성 포자, 마이크로 및 마....

Protocol

1. 루트 딥 방법 (RDM)에 의한 레이스 결정

1. 실험 환경의 준비
   1. 증상 표현은 환경 조건에 크게 의존하기 때문에 통제 된 지역에 식물을 유지하십시오. 상대 습도, 온도, 광주기 및 광도를 모니터링합니다(그림 1).
      1. 온도를 26-28 °C, 상대 습도를 50-75 %로 설정하고 적절한 식물 성장과 건강을 보장하기 위해 16 시간 광주기를 설정하십시오.
         참고 : 저산.......

Discussion

레이스 타이핑의 세 가지 방법이 제시되었습니다. 이러한 각 방법은 특정 질문 및 실험 조건에 가장 적합합니다. 감염된 커널 접종 방법 (토양 침입)은 아마도 더 간단하고 간단하여 병원성³⁰의 평가에 특히 유용합니다. 간단한 레이스 타이핑을 위해이 방법을 사용하는 것이 매우 효과적입니다. 그러나 특정 품종의 저항력을 결정하는 방법을 적용하는 것은 각 식물이 동일한 정도.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
100% Fuller’s Earth	Sigma-Aldrich	F200-5KG
1 L glass Erlenmeyer Flask	PYREX	4980-1L
15 mL falcon tubes	Fisher Scientific	14-959-49B
50 mL graduated cylinder	Lab Safety Supply	41121805
50 mL Eppendorf Conical Tubes	Fisher Scientific	05-413-921
Aluminum foil wrap	Reynolds Wrap	720
Bleach	Walmart	587192290
Bunsen burner	Fisher Scientific	03-391-301
CaCO3	sigma-Aldrich	239216
cell spreaders	Fisher Scientific	08-100-11
Cheesecloth	Lions Services, Inc	8305-01-125-0725
Clear plastic dishes	Visions Wave	999RP6CLSS	~15 cm diameter
Clear vinyl tubing for mushroom bag clamps	Shroom Supply		6" for small bag, 8" for medium bag, 10" for large bag
Cotton Balls	Fisherbrand	22-456-885	Sterile
Ethanol	Fisher Chemical	A4094	100%, then combine with water to make 70% for use
Flourescent Tube Lights	MaxLume	Model T5	2800 K Color Temperature, 24'' or 48'' long
granulated agar	VWR International	90000-786
Hand-held Spray Bottle	Ability One	24122002	~0.95 L
hemacytometer	Fisher Scientific	02-671-55A	Two chamber hemacytometer
Lab trays	Fisher Scientific	15-236-2A
Large, sealable plastic bags	Ziploc	430805	38 cm x 38 cm
Mister / watering can	Bar5F	B10H22
Mushroom Bag Clamp	Shroom Supply		6" for small bag, 8" for medium bag, 10" for large bag
Nitrile Gloves	Fisher Scientific	19-130-1597D
Organic Rye Berries	Shroom Supply		0.5 gallon or 25 lb bags
P1000 pipette and tips	Fisher Scientific	14-388-100
Petri dishes	Fisherbrand	FB0875713	Round, 100 mm diameter, 15 mm height
Planting media	Jolly Gardener	Pro-Line C/B
Plastic Pitcher	BrandTech	UX0600850	1 L or larger
Plastic planting pots	Neo/SCI	01-1177	~15 cm diameter and ~10 cm height
Plastic, autoclave-safe bin	Thermo Scientific	UX0601022	3 L
Quarter-strength potato dextrose agar media	Cole-Parmer	UX1420028	Use powder in combination with recipe for QPDA
Scientific Balance Scale, measuring in g	Ohaus	30208458	Any precise scale that can hold and measure 200g will work
Size #4 cork bore	Cole-Parmer	NC9585352
Small Mushroom grow bag	Shroom Supply		0.5 micron filter, also comes in medium and large sizes
Soil trowel	Walmart	563876946
Styrofoam flats (6 x 12 cells)	Speedling	Model TR72A
Styrofoam flats (8 x 16 cells)	Speedling	Model TR128A
Syringe (5 or 10 mL)	fisher Scientific	14-829-19C
Timer	Walmart	TM-01
V8 Original 100% Vegetable Juice	Walmart	564638212
vortex	Fisher Scientific	02-215-418
Watermelon Seed - Black Diamond	Willhite Seed Inc	17
Watermelon Seed - Calhoun Gray	Holmes Seed Company	4440
Watermelon Seed - Charleston Gray	Bonnie Plants	7.15339E+11
Watermelon Seed - PI 296341-FR	Contact authors	Contact authors
Wheat Kernels (Maxie var.) (optional)	Alachua County Feed & Seed