En kontrast av tre inokulasjonsteknikker som brukes til å bestemme løpet av ukjent Fusarium oxysporum f.sp. niveum Isolerer

Summary

Håndtering av Fusarium wilt av vannmelon krever kunnskap om patogenløpene som er tilstede. Her beskriver vi rotdipp, infisert kjernesåing og modifiserte inokulasjonsmetoder for å demonstrere deres effekt i raseskriving av den patogene sopp fusariumoksysporum f. sp niveum (Fon).

Abstract

Fusarium wilt av vannmelon (Citrullus lanatus), forårsaket av Fusarium oxysporum f. sp. niveum (Fon), har reemerged som en stor produksjonsbegrensning i det sørøstlige USA, spesielt i Florida. Distribusjon av integrerte pesthåndteringsstrategier, for eksempel rasespesifikke motstandsdyktige kultivarer, krever informasjon om patogenets mangfold og befolkningstetthet på dyrkerfeltene. Til tross for noen fremskritt i å utvikle molekylære diagnostiske verktøy for å identifisere patogenisolasjoner, krever rasebestemmelse ofte bioassay tilnærminger.

Racemetoden ble utført av root-dip inokulering, infisert kjerne såing metode, og den modifiserte skuff-dip metoden med hver av de fire vannmelon differensialer (Black Diamond, Charleston Grey, Calhoun Grey, Plant Introduction 296341-FR). Isolasjoner tildeles en rasebetegnelse ved beregning av sykdomsforekomst fem uker etter inokulasjon. Hvis mindre enn 33% av plantene for en bestemt kultivar var symptomatiske, ble de kategorisert som motstandsdyktige. De kultivarer med forekomst større enn 33% ble ansett som utsatt. Dette dokumentet beskriver tre forskjellige metoder for inokulasjon for å fastslå rase, rotdipp, infisert kjerne og modifisert skuff-dip inokulasjon, hvis applikasjoner varierer i henhold til eksperimentell design.

Introduction

De jordbårne soppene som utgjør Fusarium oxysporum artskomplekset (FOSC) er virkningsfulle hemibiotrofiske plantepatogener som kan forårsake alvorlig sykdom og gi tap i et mangfoldig utvalg av avlinger¹. Fusarium wilt av vannmelon, forårsaket av F. oxysporum f. sp. niveum (Fon), har økt i omfang, forekomst og alvorlighetsgrad over hele verden de siste tiårene ^2,3. I frøplanter vil symptomene på Fusarium ofte ligne demping. I eldre planter blir løvet grått, klorotisk og nekrotisk. Til slutt går vanning av plantene til full plantekollaps og død

Protocol

1. Bestemme rase ved root-dip metode (RDM)

1. Forberedelse av det eksperimentelle miljøet
   1. Fordi symptomuttrykk er svært avhengig av miljøforhold, opprettholder du planter i et kontrollert område. Overvåk relativ fuktighet, temperatur, fotoperiod og lysintensitet (figur 1).
      1. Sett temperaturen til 26-28 °C, relativ fuktighet til 50-75 %, og sett en fotoperiod på 16 timer for å sikre tilstrekkelig plantevekst og helse.
         MERK: For å forhindre hyp.......

Discussion

Tre metoder for raseskriving har blitt presentert. Hver av disse metodene passer best til bestemte spørsmål og eksperimentelle forhold. Den infiserte kjerneinokulasjonsmetoden (jordinfeksjon) er kanskje enklere og enklere, noe som gjør den spesielt nyttig for vurdering av patogenitet³⁰. Å bruke denne metoden for enkel race-skriving er svært effektiv. Det kan imidlertid være utfordrende å bruke metoden for å bestemme motstanden til en bestemt kultivar, gitt at hver plante ikke kan møte sam.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
100% Fuller’s Earth	Sigma-Aldrich	F200-5KG
1 L glass Erlenmeyer Flask	PYREX	4980-1L
15 mL falcon tubes	Fisher Scientific	14-959-49B
50 mL graduated cylinder	Lab Safety Supply	41121805
50 mL Eppendorf Conical Tubes	Fisher Scientific	05-413-921
Aluminum foil wrap	Reynolds Wrap	720
Bleach	Walmart	587192290
Bunsen burner	Fisher Scientific	03-391-301
CaCO3	sigma-Aldrich	239216
cell spreaders	Fisher Scientific	08-100-11
Cheesecloth	Lions Services, Inc	8305-01-125-0725
Clear plastic dishes	Visions Wave	999RP6CLSS	~15 cm diameter
Clear vinyl tubing for mushroom bag clamps	Shroom Supply		6" for small bag, 8" for medium bag, 10" for large bag
Cotton Balls	Fisherbrand	22-456-885	Sterile
Ethanol	Fisher Chemical	A4094	100%, then combine with water to make 70% for use
Flourescent Tube Lights	MaxLume	Model T5	2800 K Color Temperature, 24'' or 48'' long
granulated agar	VWR International	90000-786
Hand-held Spray Bottle	Ability One	24122002	~0.95 L
hemacytometer	Fisher Scientific	02-671-55A	Two chamber hemacytometer
Lab trays	Fisher Scientific	15-236-2A
Large, sealable plastic bags	Ziploc	430805	38 cm x 38 cm
Mister / watering can	Bar5F	B10H22
Mushroom Bag Clamp	Shroom Supply		6" for small bag, 8" for medium bag, 10" for large bag
Nitrile Gloves	Fisher Scientific	19-130-1597D
Organic Rye Berries	Shroom Supply		0.5 gallon or 25 lb bags
P1000 pipette and tips	Fisher Scientific	14-388-100
Petri dishes	Fisherbrand	FB0875713	Round, 100 mm diameter, 15 mm height
Planting media	Jolly Gardener	Pro-Line C/B
Plastic Pitcher	BrandTech	UX0600850	1 L or larger
Plastic planting pots	Neo/SCI	01-1177	~15 cm diameter and ~10 cm height
Plastic, autoclave-safe bin	Thermo Scientific	UX0601022	3 L
Quarter-strength potato dextrose agar media	Cole-Parmer	UX1420028	Use powder in combination with recipe for QPDA
Scientific Balance Scale, measuring in g	Ohaus	30208458	Any precise scale that can hold and measure 200g will work
Size #4 cork bore	Cole-Parmer	NC9585352
Small Mushroom grow bag	Shroom Supply		0.5 micron filter, also comes in medium and large sizes
Soil trowel	Walmart	563876946
Styrofoam flats (6 x 12 cells)	Speedling	Model TR72A
Styrofoam flats (8 x 16 cells)	Speedling	Model TR128A
Syringe (5 or 10 mL)	fisher Scientific	14-829-19C
Timer	Walmart	TM-01
V8 Original 100% Vegetable Juice	Walmart	564638212
vortex	Fisher Scientific	02-215-418
Watermelon Seed - Black Diamond	Willhite Seed Inc	17
Watermelon Seed - Calhoun Gray	Holmes Seed Company	4440
Watermelon Seed - Charleston Gray	Bonnie Plants	7.15339E+11
Watermelon Seed - PI 296341-FR	Contact authors	Contact authors
Wheat Kernels (Maxie var.) (optional)	Alachua County Feed & Seed