Un contraste de tres técnicas de inoculación utilizadas para determinar la raza de Fusarium oxysporum f.sp. desconocido niveum Aislantes

Summary

El manejo del marchitamiento por Fusarium de la sandía requiere el conocimiento de las razas de patógenos presentes. Aquí, describimos los métodos de inoculación de inmersión de raíz, semilla de grano infestado y inoculación de inmersión en bandeja modificados para demostrar su eficacia en la tipificación racial del hongo patógeno Fusarium oxysporum f. sp niveum (Fon).

Abstract

El marchitamiento por Fusarium de sandía (Citrullus lanatus), causado por Fusarium oxysporum f. sp. niveum (Fon), ha resurgido como una importante restricción de producción en el sureste de los Estados Unidos, especialmente en Florida. El despliegue de estrategias integradas de manejo de plagas, como los cultivares resistentes específicos de la raza, requiere información sobre la diversidad y la densidad de población del patógeno en los campos de los cultivadores. A pesar de algunos avances en el desarrollo de herramientas de diagnóstico molecular para identificar aislados de patógenos, la determinación de la raza a menudo requiere enfoques de bioensayo.

La tipificación de la raza se llevó a cabo mediante inoculación por inmersión de raíz, método de siembra de grano infestado y el método modificado de inmersión en bandeja con cada uno de los cuatro diferenciales de sandía (Black Diamond, Charleston Grey, Calhoun Grey, Plant Introduction 296341-FR). A los aislados se les asigna una designación de raza mediante el cálculo de la incidencia de la enfermedad cinco semanas después de la inoculación. Si menos del 33% de las plantas de un cultivar en particular eran sintomáticas, se clasificaban como resistentes. Aquellos cultivares con incidencia superior al 33% fueron considerados susceptibles. Este artículo describe tres métodos diferentes de inoculación para determinar la raza, la inmersión de la raíz, el núcleo infestado y la inoculación modificada de la inmersión en bandeja, cuyas aplicaciones varían según el diseño experimental.

Introduction

Los hongos transmitidos por el suelo que componen el complejo de especies de Fusarium oxysporum (FOSC) son patógenos hemibiotróficos de plantas impactantes que pueden causar enfermedades graves y pérdida de rendimiento en una amplia gama de cultivos¹. El marchitamiento por Fusarium de la sandía, causado por F. oxysporum f. sp. niveum (Fon), ha aumentado en alcance, incidencia y gravedad en todo el mundo en las últimas décadas ^2,3. En las plántulas, los síntomas del marchitamiento por Fusarium a menudo se asemejan a la amortiguación. En las plantas más....

Protocol

1. Determinación de la raza por el método de inmersión de la raíz (RDM)

1. Preparación del entorno experimental
   1. Debido a que la expresión de los síntomas depende en gran medida de las condiciones ambientales, mantenga las plantas en un área controlada. Monitoree la humedad relativa, la temperatura, el fotoperíodo y la intensidad de la luz (Figura 1).
      1. Ajuste la temperatura a 26-28 ° C, la humedad relativa a 50-75% y establezca un fotoperíodo .......

Discussion

Se han presentado tres métodos de tipificación de razas. Cada uno de estos métodos se adapta mejor a preguntas particulares y condiciones experimentales. El método de inoculación del grano infestado (infestación del suelo) es quizás más simple y directo, por lo que es especialmente útil para la evaluación de la patogenicidad³⁰. El uso de este método para escribir carreras simples es altamente efectivo. Sin embargo, aplicar el método para determinar la resistencia de un cultivar especí.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
100% Fuller’s Earth	Sigma-Aldrich	F200-5KG
1 L glass Erlenmeyer Flask	PYREX	4980-1L
15 mL falcon tubes	Fisher Scientific	14-959-49B
50 mL graduated cylinder	Lab Safety Supply	41121805
50 mL Eppendorf Conical Tubes	Fisher Scientific	05-413-921
Aluminum foil wrap	Reynolds Wrap	720
Bleach	Walmart	587192290
Bunsen burner	Fisher Scientific	03-391-301
CaCO3	sigma-Aldrich	239216
cell spreaders	Fisher Scientific	08-100-11
Cheesecloth	Lions Services, Inc	8305-01-125-0725
Clear plastic dishes	Visions Wave	999RP6CLSS	~15 cm diameter
Clear vinyl tubing for mushroom bag clamps	Shroom Supply		6" for small bag, 8" for medium bag, 10" for large bag
Cotton Balls	Fisherbrand	22-456-885	Sterile
Ethanol	Fisher Chemical	A4094	100%, then combine with water to make 70% for use
Flourescent Tube Lights	MaxLume	Model T5	2800 K Color Temperature, 24'' or 48'' long
granulated agar	VWR International	90000-786
Hand-held Spray Bottle	Ability One	24122002	~0.95 L
hemacytometer	Fisher Scientific	02-671-55A	Two chamber hemacytometer
Lab trays	Fisher Scientific	15-236-2A
Large, sealable plastic bags	Ziploc	430805	38 cm x 38 cm
Mister / watering can	Bar5F	B10H22
Mushroom Bag Clamp	Shroom Supply		6" for small bag, 8" for medium bag, 10" for large bag
Nitrile Gloves	Fisher Scientific	19-130-1597D
Organic Rye Berries	Shroom Supply		0.5 gallon or 25 lb bags
P1000 pipette and tips	Fisher Scientific	14-388-100
Petri dishes	Fisherbrand	FB0875713	Round, 100 mm diameter, 15 mm height
Planting media	Jolly Gardener	Pro-Line C/B
Plastic Pitcher	BrandTech	UX0600850	1 L or larger
Plastic planting pots	Neo/SCI	01-1177	~15 cm diameter and ~10 cm height
Plastic, autoclave-safe bin	Thermo Scientific	UX0601022	3 L
Quarter-strength potato dextrose agar media	Cole-Parmer	UX1420028	Use powder in combination with recipe for QPDA
Scientific Balance Scale, measuring in g	Ohaus	30208458	Any precise scale that can hold and measure 200g will work
Size #4 cork bore	Cole-Parmer	NC9585352
Small Mushroom grow bag	Shroom Supply		0.5 micron filter, also comes in medium and large sizes
Soil trowel	Walmart	563876946
Styrofoam flats (6 x 12 cells)	Speedling	Model TR72A
Styrofoam flats (8 x 16 cells)	Speedling	Model TR128A
Syringe (5 or 10 mL)	fisher Scientific	14-829-19C
Timer	Walmart	TM-01
V8 Original 100% Vegetable Juice	Walmart	564638212
vortex	Fisher Scientific	02-215-418
Watermelon Seed - Black Diamond	Willhite Seed Inc	17
Watermelon Seed - Calhoun Gray	Holmes Seed Company	4440
Watermelon Seed - Charleston Gray	Bonnie Plants	7.15339E+11
Watermelon Seed - PI 296341-FR	Contact authors	Contact authors
Wheat Kernels (Maxie var.) (optional)	Alachua County Feed & Seed