En kontrast av tre inokuleringstekniker som används för att bestämma rasen av okända Fusarium oxysporum f.sp. niveum Isolat

Summary

Hantering av Fusarium-vissnande av vattenmelon kräver kunskap om de patogenraser som finns. Här beskriver vi rotdopp, angripen kärnsådd och modifierade brick-dip-inokuleringsmetoder för att visa deras effektivitet vid rastypning av den patogena svampen Fusarium oxysporum f. sp niveum (Fon).

Abstract

Fusarium vissnar av vattenmelon (Citrullus lanatus), orsakad av Fusarium oxysporum f. sp. niveum (Fon), har återkommit som en stor produktionsbegränsning i sydöstra USA, särskilt i Florida. Införandet av integrerade strategier för växtskydd, såsom rasspecifika resistenta sorter, kräver information om patogenens mångfald och befolkningstäthet på odlarnas fält. Trots vissa framsteg när det gäller att utveckla molekylära diagnostiska verktyg för att identifiera patogenisolat kräver rasbestämning ofta bioassay-metoder.

Race typing utfördes genom root-dip inokulering, infekterad kärnsåddmetod och den modifierade brickdoppmetoden med var och en av de fyra vattenmelondifferenserna (Black Diamond, Charleston Grey, Calhoun Grey, Plant Introduction 296341-FR). Isolat tilldelas en rasbeteckning genom beräkning av sjukdomsincidens fem veckor efter ympning. Om mindre än 33% av växterna för en viss sort var symptomatiska, kategoriserades de som resistenta. De sorter med en incidens större än 33% betraktades som mottagliga. Denna uppsats beskriver tre olika metoder för ympning för att fastställa ras, rotdopp, infekterad kärna och modifierad brickdopp-ympning, vars tillämpningar varierar beroende på den experimentella designen.

Introduction

De jordburna svamparna som utgör Fusarium oxysporum-artkomplexet (FOSC) är påverkande hemibiotrofa växtpatogener som kan orsaka allvarlig sjukdom och avkastningsförlust i ett brett spektrum av grödor¹. Fusarium vissnar av vattenmelon, orsakad av F. oxysporum f. sp. niveum (Fon), har ökat i omfattning, förekomst och svårighetsgrad över hela världen under de senaste decennierna ^2,3. I plantor liknar symtomen på Fusarium ofta dämpning. I äldre växter blir lövverket grått, klorotiskt och nekrotiskt. Så småningom fortskrider växternas vissnande till full v....

Protocol

1. Bestämning av ras med root-dip-metod (RDM)

1. Förberedelse av experimentmiljön
   1. Eftersom symtomuttryck är mycket beroende av miljöförhållanden, behåll växter i ett kontrollerat område. Övervaka relativ luftfuktighet, temperatur, fotoperiod och ljusintensitet (figur 1).
      1. Ställ in temperaturen på 26-28 ° C, relativ luftfuktighet till 50-75% och ställ in en 16 timmars fotoperiod för att säkerställa tillräcklig växttillväxt och hälsa.......

Discussion

Tre metoder för rasskrivning har presenterats. Var och en av dessa metoder passar bäst för särskilda frågor och experimentella förhållanden. Den infekterade kärninokuleringsmetoden (jordangrepp) är kanske enklare och enklare, vilket gör den särskilt användbar för bedömning av patogenicitet³⁰. Att använda denna metod för enkel race-typing är mycket effektiv. Att använda metoden för att bestämma resistensen hos en viss sort kan dock vara utmanande, med tanke på att varje växt k.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
100% Fuller’s Earth	Sigma-Aldrich	F200-5KG
1 L glass Erlenmeyer Flask	PYREX	4980-1L
15 mL falcon tubes	Fisher Scientific	14-959-49B
50 mL graduated cylinder	Lab Safety Supply	41121805
50 mL Eppendorf Conical Tubes	Fisher Scientific	05-413-921
Aluminum foil wrap	Reynolds Wrap	720
Bleach	Walmart	587192290
Bunsen burner	Fisher Scientific	03-391-301
CaCO3	sigma-Aldrich	239216
cell spreaders	Fisher Scientific	08-100-11
Cheesecloth	Lions Services, Inc	8305-01-125-0725
Clear plastic dishes	Visions Wave	999RP6CLSS	~15 cm diameter
Clear vinyl tubing for mushroom bag clamps	Shroom Supply		6" for small bag, 8" for medium bag, 10" for large bag
Cotton Balls	Fisherbrand	22-456-885	Sterile
Ethanol	Fisher Chemical	A4094	100%, then combine with water to make 70% for use
Flourescent Tube Lights	MaxLume	Model T5	2800 K Color Temperature, 24'' or 48'' long
granulated agar	VWR International	90000-786
Hand-held Spray Bottle	Ability One	24122002	~0.95 L
hemacytometer	Fisher Scientific	02-671-55A	Two chamber hemacytometer
Lab trays	Fisher Scientific	15-236-2A
Large, sealable plastic bags	Ziploc	430805	38 cm x 38 cm
Mister / watering can	Bar5F	B10H22
Mushroom Bag Clamp	Shroom Supply		6" for small bag, 8" for medium bag, 10" for large bag
Nitrile Gloves	Fisher Scientific	19-130-1597D
Organic Rye Berries	Shroom Supply		0.5 gallon or 25 lb bags
P1000 pipette and tips	Fisher Scientific	14-388-100
Petri dishes	Fisherbrand	FB0875713	Round, 100 mm diameter, 15 mm height
Planting media	Jolly Gardener	Pro-Line C/B
Plastic Pitcher	BrandTech	UX0600850	1 L or larger
Plastic planting pots	Neo/SCI	01-1177	~15 cm diameter and ~10 cm height
Plastic, autoclave-safe bin	Thermo Scientific	UX0601022	3 L
Quarter-strength potato dextrose agar media	Cole-Parmer	UX1420028	Use powder in combination with recipe for QPDA
Scientific Balance Scale, measuring in g	Ohaus	30208458	Any precise scale that can hold and measure 200g will work
Size #4 cork bore	Cole-Parmer	NC9585352
Small Mushroom grow bag	Shroom Supply		0.5 micron filter, also comes in medium and large sizes
Soil trowel	Walmart	563876946
Styrofoam flats (6 x 12 cells)	Speedling	Model TR72A
Styrofoam flats (8 x 16 cells)	Speedling	Model TR128A
Syringe (5 or 10 mL)	fisher Scientific	14-829-19C
Timer	Walmart	TM-01
V8 Original 100% Vegetable Juice	Walmart	564638212
vortex	Fisher Scientific	02-215-418
Watermelon Seed - Black Diamond	Willhite Seed Inc	17
Watermelon Seed - Calhoun Gray	Holmes Seed Company	4440
Watermelon Seed - Charleston Gray	Bonnie Plants	7.15339E+11
Watermelon Seed - PI 296341-FR	Contact authors	Contact authors
Wheat Kernels (Maxie var.) (optional)	Alachua County Feed & Seed