अक्षुण्ण माउस और ज़ेब्राफ़िश मस्तिष्क में गहरे ऊतक तीन फोटॉन प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी

मल्टीफोटॉन माइक्रोस्कोपी तकनीक, जैसे कि दो-फोटॉन माइक्रोस्कोपी (2 PM) और तीन-फोटॉन माइक्रोस्कोपी (3PM), उपकोशिकीय रिज़ॉल्यूशन के साथ विवो इमेजिंग में गहरे ऊतक के लिए शक्तिशाली उपकरण हैं। 3PM में 2PM पर गहरे ऊतक इमेजिंग के लिए दो प्रमुख फायदे हैं जो जीव विज्ञान प्रयोगशालाओं में व्यापक रूप से उपयोग किए जाते हैं: (i) ~ 1,300 एनएम या ~ 1,700 एनएम उत्तेजना लेजर को नियोजित करके बिखरने वाले ऊतकों में लंबी क्षीणन लंबाई; (ii) उच्च-क्रम अरेखीय उत्तेजना के कारण कम पृष्ठभूमि प्रतिदीप्ति उत्पादन। नतीजतन, 3PM उच्च-विपरीत संरचनात्मक और कार्यात्मक इमेजिंग को प्रकीर्णन ऊतकों के भीतर गहराई से अनुमति देता है जैसे कि कॉर्टिकल परतों से हिप्पोकैम्पस तक बरकरार माउस मस्तिष्क और वयस्क ज़ेब्राफ़िश के पूरे अग्रमस्तिष्क।

आज, 3PM के लिए उपयुक्त लेजर स्रोत व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं, जो मौजूदा दो-फोटॉन (2P) इमेजिंग सिस्टम को तीन-फोटॉन (3P) सिस्टम में परिवर्तित करने में सक्षम बनाता है। इसके अतिरिक्त, कई वाणिज्यिक 3 पी माइक्रोस्कोप उपलब्ध हैं, जो इस तकनीक को जीव विज्ञान अनुसंधान प्रयोगशालाओं के लिए आसानी से उपलब्ध कराता है। यह पेपर एक विशिष्ट 3PM सेटअप के अनुकूलन को दिखाता है, विशेष रूप से जीव विज्ञान समूहों को लक्षित करता है जिनके पास पहले से ही 2P सेटअप है, और बरकरार माउस और वयस्क ज़ेब्राफ़िश दिमाग में इंट्रावाइटल 3 डी इमेजिंग प्रदर्शित करता है। इस प्रोटोकॉल में माइक्रोस्कोप संरेखण, ~ 1,300 और ~ 1,700 एनएम लेजर दालों, पशु तैयारी, और इंट्रावाइटल 3 पी प्रतिदीप्ति इमेजिंग वयस्क ज़ेब्राफ़िश और माउस दिमाग में गहरी इंट्रावाइटल 3 पी प्रतिदीप्ति इमेजिंग सहित 3 पी इमेजिंग की पूरी प्रयोगात्मक प्रक्रिया शामिल है।