Deep-Tissue Three-Photon 형광 현미경 검사 in Intact Mouse and Zebrafish Brain

2광자 현미경 (2PM) 및 3 광자 현미경 (3PM)과 같은 다중 광자 현미경 기술은 세포 내 해상도로 생체 내 심부 조직 이미징을위한 강력한 도구입니다. 3PM은 생물학 실험실에서 널리 사용 된 2PM 이상의 심부 조직 이미징에 대한 두 가지 주요 이점을 가지고 있습니다 : (i) ~ 1,300 nm 또는 ~ 1,700 nm 여기 레이저를 사용하여 산란 조직에서 더 긴 감쇠 길이; (ii) 고차 비선형 여기로 인한 배경 형광 생성 감소. 그 결과, 3PM은 피질층에서 해마, 성인 제브라피쉬의 전뇌 전체에 이르기까지 온전한 마우스 뇌와 같은 산란 조직 깊숙한 곳에서 고대비 구조 및 기능적 이미징을 허용합니다.

오늘날 3PM에 적합한 레이저 소스가 상용화되어 기존의 2P(2P) 이미징 시스템을 3광자(3P) 시스템으로 전환할 수 있습니다. 또한 여러 상업용 3P 현미경을 사용할 수 있으므로 생물학 연구소에서이 기술을 쉽게 사용할 수 있습니다. 이 논문은 전형적인 3PM 설정, 특히 이미 2P 설정이있는 생물학 그룹을 대상으로하는 최적화를 보여 주며 손상되지 않은 마우스 및 성인 제브라 피쉬 뇌에서 생체 내 3D 이미징을 보여줍니다. 이 프로토콜은 현미경 정렬, ~ 1,300 및 ~ 1,700 nm 레이저 펄스의 프리 치핑, 동물 준비 및 성인 제브라 피쉬 및 마우스 두뇌 깊숙한 곳에서 중요한 3P 형광 이미징을 포함한 3P 이미징의 전체 실험 절차를 다룹니다.