Sağlam Fare ve Zebra Balığı Beyinde Derin Doku Üç Fotonlu Floresan Mikroskopisi

İki foton mikroskobu (2PM) ve üç foton mikroskobu (3PM) gibi multifoton mikroskopi teknikleri, hücre altı çözünürlükte derin doku in vivo görüntüleme için güçlü araçlardır. 3PM, biyoloji laboratuvarlarında yaygın olarak kullanılan 2PM'ye göre derin doku görüntüleme için iki önemli avantaja sahiptir: (i) ~ 1.300 nm veya ~ 1.700 nm uyarma lazeri kullanılarak saçılma dokularında daha uzun zayıflama uzunluğu; (ii) daha yüksek dereceli doğrusal olmayan uyarma nedeniyle daha az arka plan floresan üretimi. Sonuç olarak, 3PM, kortikal katmanlardan hipokampusa ve yetişkin zebra balıklarının tüm ön beynine kadar bozulmamış fare beyni gibi saçılma dokularının derinliklerinde yüksek kontrastlı yapısal ve işlevsel görüntülemeye izin verir.

Bugün, 3PM için uygun lazer kaynakları ticari olarak temin edilebilmekte ve mevcut iki fotonlu (2P) görüntüleme sisteminin üç fotonlu (3P) bir sisteme dönüştürülmesini sağlamaktadır. Ek olarak, birden fazla ticari 3P mikroskop mevcuttur, bu da bu tekniği biyoloji araştırma laboratuvarları için hazır hale getirir. Bu makale, özellikle zaten 2P kurulumuna sahip biyoloji gruplarını hedefleyen tipik bir 3PM kurulumunun optimizasyonunu göstermektedir ve bozulmamış fare ve yetişkin zebra balığı beyinlerinde intravital 3D görüntülemeyi göstermektedir. Bu protokol, mikroskop hizalaması, ~ 1.300 ve ~ 1.700 nm lazer darbelerinin ön cıvıltıları, hayvan hazırlığı ve yetişkin zebra balığı ve fare beyinlerinin derinliklerinde intravital 3P floresan görüntüleme dahil olmak üzere 3P görüntülemenin tam deneysel prosedürünü kapsar.