Моделирование паракринной неканонической сигнализации Wnt in vitro

Неканоническая передача сигналов Wnt регулирует внутриклеточную организацию актиновой нити и поляризованную миграцию клеток-предшественников во время эмбриогенеза. Этот процесс требует сложных и скоординированных паракринных взаимодействий между сигнальными и сигнальными клетками. Учитывая, что эти взаимодействия могут происходить между различными типами клеток из разных линий, оценка in vivo клеточных специфических дефектов может быть сложной задачей. Настоящее исследование описывает высоковоспроизводимый метод оценки паракринной неканонической передачи сигналов Wnt in vitro. Этот протокол был разработан с возможностью (1) проведения функциональных и молекулярных оценок неканонической передачи сигналов Wnt между любыми двумя типами клеток, представляющими интерес; (2) проанализировать роль молекул, посылающих сигнал, по сравнению с молекулами, принимающими сигнал в неканоническом сигнальном пути Wnt; и (3) проводить фенотипические спасательные эксперименты со стандартными молекулярными или фармакологическими подходами.

Этот протокол использовался для оценки неканонической передачи сигналов Wnt в миобластах, опосредованной нейронными гребневыми клетками (NCC). Наличие NCC связано с увеличением числа фаллоидин-положительных цитоплазматических филоподий и ламеллиподий в миобластах и улучшенной миграцией миобластов в ранозаживляющем анализе. Ось Wnt5a-ROR2 была идентифицирована как важнейший неканонический сигнальный путь Wnt между NCC и кардиомиобластами второго поля сердца (SHF). В заключение, это очень удобный протокол для изучения паракринных неканонических сигнальных механизмов Wnt in vitro.